物质的吸收光谱曲线和朗伯比尔定律.docVIP

物质溶液的光谱吸收曲线 1.高锰酸钾（KMnO4）溶液的光谱吸收曲线（吸收峰波长525nm。） 2. 如何获得物质的光谱吸收曲线？ 物质的吸收光谱曲线是通过实验获得的，具体方法是：将不同波长的光依次通过某一固定浓度和厚度的有色溶液，分别测出它们对各种波长光的吸收程度(用吸光度A表示)，以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标作图，画出曲线，此曲线即称为该物质的光吸收曲线（又称光谱吸收曲线），它描述了物质对不同波长光的吸收程度。图6—2所示为三种不同浓度的高锰酸钾溶液 （KMnO4）溶液的三条光吸收曲线。由图中可以看出：①高锰酸钾溶液对不同波长的光的吸收程度是不同的，对波长为525nm的绿色光吸收最多，在吸收曲线上有一高峰(称为吸收峰)。光吸收程度最大处的波长称为最大吸收波长(常以Amax表示)。在进行光度测定时，通常都是选取在Amax的波长处来测量，因为这时可得到最大的灵敏度。②不同浓度的高锰酸钾溶液，其吸收曲线的形状相似，最大吸收波长也一样。所不同的是吸收峰峰高随浓度的增加而增高。③不同物质的吸收曲线，其形状和最大吸收波长各不相同，它和分子结构有严格的对应关系。因此，可利用吸收曲线来作为物质定性分析的依据。 3.再看两个例子 1）还原型辅酶（NADH）的光谱吸收曲线（吸收峰分别在260nm和340nm） 生化谷丙转氨酶检验试剂的反应原理如下： α-酮戊二酸 + L-丙氨酸 L-谷氨酸 + 丙酮酸（初反应） 丙酮酸 + NADH + H+ L- 乳酸 + NAD+ （主反应） NADH的氧化速率与样本中ALT酶活力成正比，NADH在340nm处有特征吸收峰，在340nm处测其吸光度的下降速率即可计算出ALT的活性。 2）维生素B12水溶液的光谱吸收曲线 （峰值365nm） 吸收光谱曲线 非散射 (2)吸光系数 K称为吸光系数，其物理意义是：单位浓度的溶液液层厚度为1cm时，在一定波长下测得的吸光度。K值的大小取决于吸光物质的性质、入射光波长、溶液温度和溶剂性质等，与溶液浓度大小和液层厚度无关。但K值大小因溶液浓度所采用的单位不同而异。 ①摩尔吸光系数e。当溶液的浓度以物质的量浓度(mol／L)表示，液层厚度以厘米(cm)表示时，相应的比例常数K称为摩尔吸光系数。以e表示，其单位为L／(m01．cm)。这样，可以改写成A—abe’.摩尔吸光系数的物理意义是：浓度为ltool／L的溶液，于厚度为1cm的吸收池中，在一定波长下测得的吸光度。 摩尔吸光系数是吸光物质的重要参数之一，它表示物质对某一特定波长光的吸收能力。e愈大，表示该物质对某波长光的吸收能力愈强，测定的灵敏度也就愈高。因此，测定时，为了提高分析的灵敏度，通常选择摩尔吸光系数大的有色化合物进行测定，选择具有最大e值的波长作入射光。一般认为s1×10。L／(mol·cm)灵敏度较低；￡在1 x 10。～6×10。L／(mol·cm)之间属中等灵敏度；e6×10。L／(。mol·cm)属高灵敏度。 摩尔吸光系数由实验测得。在实际测量中，不能直接取1mol／L这样高浓度的溶液去测量摩尔吸光系数，只能在稀溶液中测量后，换算成摩尔吸光系数。已知含Fe。+浓度为500tzg／L溶液用KCNS显色，在波长480nm处用2cm吸收池测得A—O．197，计算摩尔吸光系数。 ②质量吸光系数。质量吸光系数适用于摩尔质量未知的化合物。若溶液浓度以质量浓度p(g／L)表示，液层厚度以厘米(cm)表示，相应的吸光度则为质量吸光度，以n表示，其单位为L／(g·cm)。这样可表示为A—n(3)吸光度的加和性在多组分体系中，在某一波长下，如果各种对光有吸收的物质之间没有相互作用，则体系在该波长处的总吸光度等于各组分吸光度的和，即吸光度具有加和性，称为吸光度加和性原理。各吸光度的下标表示组分1，2，…，n。吸光度的加和性对多组分同时定量测定、校正干扰等都极为有用。(4)影响吸收定律的主要因素根据光吸收定律，在理论上，吸光度对溶液浓度作图所得的直线的截距为零，斜率为￡6。实际上吸光度与浓度关系有时是非线性的，或者不通过零点，这种现象称为偏离光吸收.如果溶液的实际吸光度比理论值大，则为正偏离吸收定律；吸光度比理论值小，为负偏离吸收定律。引起偏离光吸收定律的原因主要有下面几方面。①入射光非单色性引起偏离。吸收定律成立的前提是：入射光是单色光。但实际上，一般单色器所提供的入射光并非是纯单色光，而是由波长范围较窄的光带组成的复合光。而物质对不同波长光的吸收程度不同(即吸光系数不同)，因而导致了对吸光定律的偏离.入射光中不同波