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胶体金免疫层析技术 庄捷 什么叫胶体金免疫层析技术 胶体金免疫层析技术就是以胶体金为显色媒介，利用免疫学中抗原抗体能够特异性结合原理，在层析过程中完成这一反应，从而达到检测的目的。 胶体金免疫层析中的三大技术 胶体金技术： 为诊断提供肉眼可见的显色媒介 膜技术 原料的固化载体，层析的动力来源 免疫学技术 特异性的检测样本中需要检测物质 胶体金技术 什么叫胶体金： 胶体金是一群以胶体状态，粒径在微米级以下的悬浮于水溶液中的金的颗粒。 胶体金发展历史 古代： 用于提炼长生不老药物； 玻璃染色。 近现代： 19世纪50年代由Michael Faraday第一次人工合成纯胶体金 1971年胶体金被 第一次用于电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察沙门氏菌 1974年Romano将胶体金标记在第二抗体（马抗人IgG）上，建立了间接免疫胶体金染色法 1978年geoghega发现了胶体金标记物在光镜水平的应用 胶体金的结构： 胶体金结构： 胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。 胶体金的性质 ∆染色—不同粒径，不同颜色 ∆ 胶体的特性—充分的溶解性，良好的流动性 ∆吸附能力—在不改变蛋白性质的情况下，稳 定迅速的吸附蛋白 粒径 颜色 2～5nm 橙色的 10～20nm 酒红色 30～80nm 紫红色 胶体金的应用 胶体金在电镜水平的应用 胶体金在光镜水平的应用 胶体金在流式细胞仪中的应用 免疫印迹技术 膜技术 什么叫硝酸纤维素膜？ 以硝酸纤维素为基质，经过匀浆，滚筒铺膜，烘制成型从而制的一定孔径的硝酸纤维素膜。 匀浆配方决定硝酸纤维素膜的性质。 烘制速度决定硝酸纤维素膜的孔径。 硝酸纤维素膜的结构和性质 硝酸纤维素膜的性质： ◊ 微孔性：层析动力的来源 ◊ 多孔性：样本流动性 ◊ 蛋白吸附能力： ◊ 样本过滤： 孔径（μM） 流速(S/4cm) 0.2 180 0.45 135 0.8 75 硝酸纤维素膜的应用 ◊ 滤膜 ◊ 分子杂交 ◊ 核酸、蛋白转印 ◊ 免疫层析 免疫学的定义 是机体识别“自身”与“非己”抗原，对自身抗原形成天然免疫耐受，对“非己”抗原产生排斥作用的一种生理功能。正常情况下，这种生理功能对机体有益，可产生抗感染、抗肿瘤等维持机体生理平衡和稳定的免疫保护作用 免疫学的发展 ◊ 经验免疫学时期 在实践中创造性地发明了人痘苗 ◊经典免疫学时期 由人体现象的观察进入了科学实验时期 ◊近代免疫学时期 出现了全新的免疫学理论 ◊现代免疫学时期 从分子水平对免疫系统进行研究 抗原抗体的结合 抗原抗体——钥匙和锁的关系 抗体能够特异性的结合抗原的活性位点。 基因工程—人造蛋白的诞生及意义 基因工程指按人们意愿设计，通过改造基因或基因组而改变生物的遗传特性，从而获得新的品种货或产品。 意义：可以稳定的获得人类所要的蛋白。 胶体金免疫层析技术的诞生和发展 ◊ 20世纪90年代初，第一个免疫层析产品诞生——用于人绒毛膜促性腺激素(HCG)的测定。 ◊ 在其后的20年中，免疫层析产品得到了快速的发展： 项目 所占百分比 早孕检测 90%以上 毒品检测 80-90% 疾病检测 30-40% 胶体金免疫层析技术的特点 ◊ 快速，定性 10分钟以内就可得到检测结果。 ◊ 无需设备 一根检测条就能完成检测 ◊ 准确、灵敏 灵敏度可以达到10-9数量级 胶体金免疫层析技术的发展 ◊ 应用范围不断扩大 疾病诊断，食品安全，药物检测，DNA检测 ◊ 特异性，灵敏度不断提高 ◊ 半定量，定量检测： 银染色胶体金免疫层析技术； 免疫荧光技术； 时间分辨荧光技术 HCG 检测 灵敏度 特异性 样本 早期HCG检测条 2000mIU 与LH等交叉 尿液 现在HCG检测条 20mIU 特异性检测HCG 尿液，血清，全血 The END 谢谢