流式细胞原理及构造-南京医科大学分析测试中心.PDFVIP

0/ 13 流式细胞原理及构造 1/ 13 流式细胞术发展史 纵观历史 几乎没有哪一门科学技术象流式细胞术这样凝结了众多不同学术背景 不同 科研领域的科学家的心血 从流式细胞术的发明 改进 流式细胞仪的研制 革新 到今天 的众多应用领域的拓展 每一步都是诸如生物学 生物技术 计算机科学 电子工程学 流 体力学 激光技术 高等数学 临床医学 分子生物学 有机化学和物理学等学科知识综合 运用的结晶 而现代流式细胞术 更是由于结合了单克隆抗体技术 定量细胞化学和定量荧 光细胞化学的应用 使其在生物学 临床医学 药物学等等众多研究领域的应用有了更加突 飞猛进的发展 而这一切 就要求我们的流式细胞仪使用者和科研人员一定要不断地有意识 地学习上述各门学科的知识 只有这样 才能更好地将流式细胞仪应用到我们的临床和科研 中去 流式细胞术发展史 1930年 Caspersson和Thorell开始致力于细胞的计数 1934年 Moldaven是世界上最早设想使细胞检测自动化的人 他试图用光电仪记录流过一 根毛细管的细胞 1936年 Caspersson等引入显微光度术 1940年 Coons提出用结合了荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白 1947年 Guclcer运用层流和湍流原理研制烟雾微粒计数器 1949年 Wallace Coulter提出在悬液中计数粒子的方法的专利 1950年 Caspersson用显微分光光度计的方法在UV和可见光光谱区检测细胞 1953年 Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理 成功的设计红细胞光学自动数器 2/ 13 同年 Parker和Horst描述一种全血细胞计数器装置 成为流式细胞仪的雏形 1954年 Beirne和Hutcheon发明光电粒子计数器 1959年 B型Coulter计数器 1965年 Kamemtsky等提出两个设想 一是用分光光度计定量细胞成分 二是结合测量值对 细胞分类 1967年 Kamentsky和Melamed在Moldaven的方法的基础上提出细胞分选的方法 1969年 Van DillaFulwyler及其同事们在 Los AlamosNM(即现在的 National Flow Cytometry Resource Labs) 发明第一台荧光检测细胞计 1972年 Herzenberg研制出一个细胞分选器的改进型 能够检测出经过荧光标记抗体染色 的细胞的较弱的荧光信号 1975年 Kohler和Milstein提出了单克隆抗体技术 为细胞研究中大量的特异的免疫试剂 的应用奠定了基础 从此 大量的厂家不断研制生产出自己的流式细胞仪 流式细胞术进入了一个空前飞速发展 的时代 科学家们 仪器制造商们又纷纷将研究焦点转向荧光染料的开发 细胞的制备方法 和提高电子信号的处理能力上来 进入九十年代 流式细胞术作为一门生物检测技术已经日 臻完善 而随之而来的就是应用领域的日趋广泛 而今 流式细胞仪已经深入到生物学 医 学 药物学等的各个分支领域 并将在未来为我们的科学研究发挥更大的作用 流式细胞仪构造和工作原理 一 概述 流式细胞仪(Flow Cytometer简称FCM)是一项集激光技术 电子物理技术 光电测量技 术 计算机技术以及细胞荧光化学技术 单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器 概括来 说 流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数的 快速的 定量分析和分选的技术 从开始设想到第一台仪器的问世,科技工作者进行了不懈的努力 随着各相关技术的迅速发展 FCM技术已经成为日益完善的细胞分析和分选的工具 FCM仪器分为二大类 一类为台式机 其特点为 仪器的光路调节系统固定 自动化程 度高 操作简便 易学易掌握 另一类为大型机 其特点为可快速将所感兴趣的细胞分选出 来 并且可将单个或指定个数的细胞分选到特定的培养孔或板上 同时可选配多种波长和类 型的激光器 适用于更广泛更灵活的科学研究应用 二 流式细胞仪构造 FCM的结构一般可分为五部分 (1)流动室及液流驱动系统; (2)激光光源及光束成