第七章紫外可见分光光度法技术总结.pptVIP

一、概述 – 分子光谱 一、概述 – 分子光谱 二、紫外可见光谱 二、紫外可见吸收光谱 二、紫外可见吸收光谱 紫外光谱中常用的术语 紫外光谱中常用的术语 紫外光谱中常用的术语 紫外光谱中常用的术语 有机化合物紫外-可见吸收光谱 有机化合物紫外-可见吸收光谱 有机化合物紫外-可见吸收光谱 有机化合物紫外-可见吸收光谱 溶剂对紫外吸收光谱的影响 化合物的定性分析 异构体的确定 成分分析 测定蛋白浓度 本章重点 P168习题18 （10 min) 习题18答案 鉴定的方法有两种： （1）与标准物、标准谱图对照：将样品和标准物以同一溶剂配制相同浓度溶液，并在同一条件下测定，比较光谱是否一致。 （2）吸收波长和摩尔吸光吸收：如果样品和标准物的吸收波长相同，摩尔吸光吸收也相同，可以认为样品和标准物是同一物质。 化合物的定性分析 ⑴若在200～750nm波长范围内无吸收峰，则可能是直链烷烃、环烷烃、饱和脂肪族化合物或仅含一个双键的烯烃等。不含共轭体系，无醛、酮、溴、碘。 官能团鉴定 ⑵若在270～350nm波长范围内有低强度吸收峰(ε＝10～100L·mol-1·cm-1),（n→π跃迁），则可能含有一个简单非共轭且含有n电子的生色团，如羰基。 ⑶若在2５0～300nm波长范围内有中等强度的吸收峰则可能含苯环。 化合物的结构分析 ⑷若在210～250nm波长范围内有强吸收峰，则可能含有2个共轭双键；若在260～300nm波长范围内有强吸收峰，则说明该有机物含有3个或3个以上共轭双键。 ⑸若该有机物的吸收峰延伸至可见光区，则该有机物可能是长链共轭或稠环化合物。 化合物的结构分析 五、应用- 有机分析 异构体的确定 反式异构体的λmax 和εmax大于顺式异构体 化合物纯度的检验 氢键强度的测定 成分分析 对于构造异构体，可以通过经验规则计算出λmax值与实测值比较，即可证实化合物是哪种异构体。对于顺反异构体，一般来说，某一化合物的反式异构体的λmax和εmax大于顺式异构体。另外还有互变异构体，常见的互变异构体有酮－烯醇式互变异构，如乙酰乙酸乙酯的酮－烯醇式互变异构。 紫外光谱在有机化合物的成分分析方面的应用比其在化合物定性鉴定方面具有更大的优越性，方法的灵敏度高，准确性和重现性都很好，应用非常广泛。只要对近紫外有吸收或可能有吸收的化合物，均可用紫外分光光度法进行测定，定量基础朗伯-比尔定律。 蛋白浓度可用紫外吸收法进行测定，基于蛋白质中的Tyr, Trp 以及Phe在280 nm有最大特征吸收所建立的方法，同时核酸在 260 nm有特征吸收，需要校正以除干扰。 1. 紫外-可见吸收光谱法的特点、基本原理。 2. Lambert-Beer定律物理意义、成立条件及影响因素。 3. 吸光系数的物理意义、两种表达形式及其相互关系。 4.紫外-可见分光光度法单组分定量的各种方法。 5.紫外-可见吸收光谱产生的原因，电子跃迁类型、吸收带的类型、特点。 6.紫外-可见分光光度计的基本部件、工作原理。 7.紫外-可见分光光度法对化合物定性鉴别、纯度检查及定量分析的基本方法。 8. 紫外光谱与有机物分子结构的关系。 知识回顾 酸的浓度常数：Ka= [H+][B-]/[HB] 酸碱指示剂：为弱的有机酸或碱,其酸式和它的共轭碱具有不同的颜色,当溶液pH改变时，指示剂发生质子的转移引起结构上的改变而导致颜色的变化 (如（甲基橙、酚酞等等）。 吸收定律：A= εbc, 注意每个符号代表什么？ 吸光度的加合性: 如溶液中含有n中彼此不相互作用的组分，它们对某一波长的光都产生吸收，那么该溶液对该波长光吸光度A总等于溶液中各组分吸光度之和。 A总= A1 + A2 + A3 +… + An 偏离朗伯—比耳定律的原因 当溶液浓度较高时，标准曲线常发生弯曲，称为偏离朗伯—比耳定律。 原因 物理性因素 化学性因素 物理性因素 难以获得真正的纯单色光—— 仪器的原因 选择比较好的单色器 将入射波长选定在待测物质的最大吸收波长且吸收曲线较平坦处 解决办法 前提条件之一：入射光为单色光 化学性因素 假定：所有的吸光质点之间不发生相互作用 当溶液浓度c 10 －2 mol/L 时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。 溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度 例： 铬酸盐或重铬酸盐溶液中存在下列平衡： CrＯ42- ＋2H＋ = Cr2Ｏ72- ＋H2Ｏ 溶液中CrＯ42-、 Cr2Ｏ72-的颜色不同，吸光性质也不相同,故溶液pH 对测定有重要影响. 四、紫外可见分光光度计 四、紫外可见分光光度计 Hitachi U