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第二节 细胞工程简介 ﹝4﹞动物细胞培养应用 生产有价值的蛋白质制品,(如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体、动物激素) 检测有毒物质 3.用于某些器官移植 P70教材 实验原理:___________________________ 有毒物质会使动物细胞发生染色体变异 ⑴制备细胞悬浮液 实验步骤: ⑵进行细胞培养 ⑶制作临时装片 ⑷镜检和统计 结果分析与结论 设计实验: 验证某有毒物质能使细胞 发生染色体变异。 (3)动物细胞培养和植物组织培养的比较 动物细胞培养 植物组织培养 应用 目的 培养基 原理 大量新生细胞或细胞产品 单克隆抗体 细胞的全能性 固体培养基:成分主要是矿质元素、蔗糖、维生素、植物激素等 获得新个体或细胞产品 快速繁殖试管苗,培育无病毒植株;细胞产品;人工种子;转基因植物的培育、花药离体培养 细胞的增殖 液体培养基:成分主要是葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清 动物细胞融合过程 杂种细胞 愈伤组织 杂种植株 植物细胞A 植物细胞B 原生质体A 原生质体B 植物体细胞杂交 去壁 融合 组培 物理法 化学法 生物法: 灭活的病毒 动物细胞A 动物细胞B 杂种细胞 有何同?不同? 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用 途 物理、化学方法 (同左) 灭活的病毒 物理(离心、振 荡、电刺激) 化学(聚乙二醇) 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 细胞融合的原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 比较项目 4、植物、动物细胞融合的比较 细胞A 细胞B 杂种细胞 物理法、化学法 灭活的病毒 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞 杂交瘤细胞 筛选 (特定的选择性培养基) 培养 单克隆抗体 体外培养 注射到小鼠腹腔 2次筛选 3次培养 培养,筛选 分泌抗体的杂交瘤细胞 细胞群 骨髓瘤细胞? 选出能产特定抗体细胞群、继续培养 体外培养 从培养液中获取 促融方法? 3.单克隆抗体制备过程 原代培养(10代) 传代培养40~50代 细胞株 跨50代 细胞系 用胰蛋白酶处理成单个细胞 抗原? 淋巴细胞? 体内培养 从腹水中提取 单克隆抗体 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 细胞中有膜的结构有: 细胞膜、内质网、高尔基体、液泡、溶酶体 核膜、线粒体、叶绿体、 组成成分相似,结构大致相同,因而统称为 “生物膜”。 : 细胞内由细胞膜、核膜、内质网膜、高尔基体膜、线粒体膜、质体膜等膜结构组成的统一整体。 一、细胞的生物膜系统 很少 24% 76% 线粒体内膜 很少 48% 52% 线粒体外膜 很少 33% 67% 内质网膜 2.9% 35% 59% 大鼠肝细胞核膜 8% 43% 49% 人红细胞膜 糖类 脂类 蛋白质 生物膜 各种生物膜的成分及含量 组成生物膜的成分:蛋白质、脂质、糖类 不同膜结构上的各成分的种类和数量不同; 生物膜都具有流动性和选择透过性 膜的功能越复杂,蛋白质含量越高 二、生物膜在结构上的联系 (1)外层核膜-----内质网膜-----细胞膜 (2)内质网膜和线粒体膜有联系。 (3)内质网膜和高尔基体不直接相连 小结:内质网膜可通过小泡转化成高尔基体膜; 高尔基体膜又可通过分泌小泡形成细胞膜; 细胞膜可以内陷形成小泡形成高尔基体 液泡、叶绿体的膜与其它具膜的结构 之间也有一定联系 细胞内的生物膜在结构上具有一定的连续性。 内质网 向内 直接 向外 直接 细胞膜 线粒体 高尔基体 核膜 直接 间接 间接 科学家用3H标记亮氨酸供给豚鼠的胰腺细胞以合成蛋白质。 三、生物膜在功能上的联系 细胞膜内侧的小泡和释放到细胞外的分泌物中 117分钟 高尔基体 17分钟后 有核糖体的内质网 3分钟后 位 置 时 间 2、细胞的生物膜在功能上的联系 核糖体 内质网 小泡 高尔基体 小泡 细胞膜 细胞外 线粒体 (供能) (形成蛋白质) (粗加工) (较成熟的蛋白质) (再加工) (成熟蛋白质) (小泡与细胞膜融合) 由此可见,细胞内的各种生物膜不但在结构上互相连系,在功能上也是既有分工又相互联系的。各种生物膜的分工合作、相互配合是细胞生命活动协调进行的结构与功能的基础。 细胞内由细胞膜、核膜、内质网膜、高尔基体膜、线粒体膜、质体膜等膜结构组成的统一整体。 生物膜系统的概念 №1:使细胞具有一个相对稳定的内部环境。在物质的运输、能量交换及信息传递中起决定性作用。 №2:增大膜的面积,供酶、核糖体等附着在上
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