1.1DNA重组技术的基本工具(精校版)技术总结.ppt

作用部位： 是磷酸二酯键（扶手） 不是氢键（梯子） DNA连接酶将两条DNA链连接起来的酶。 连接黏性末端 连接黏性末端和平末端 分类 作用 E.coli DNA连接酶 连接酶种类： T4DNA连接酶 专题1 基因工程 §1-1 DNA重组技术的基本工具 设想？ 能否培养出具有抗虫 性状的抗虫棉呢？ 基因工程的概念 基因工程：指按照人们的愿望,进行严格的设计并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性,创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作DNA重组技术或基因拼接技术。 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 原理 目的 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 定向改造生物的遗传性状 剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 基因工程的概念理解 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 苏云金芽孢杆菌 提取 抗虫基因 普通棉花(无抗虫特性) 棉花细胞(含抗虫基因) 与载体DNA拼接，导入 棉花植株(有抗虫特性) 表达 基因工程培育抗虫棉的关键步骤： 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 §1-1 DNA重组技术的基本工具 “分子手术刀” ──限制酶 “分子缝合针” ──DNA连接酶 “分子运输车” ──基因进入受体细胞的载体 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 主要从原核生物分离纯化出来 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 5、结果： 形成两种末端 一、“分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 4、切割方式： 错位切和平切 A T G C A T G C 限制酶切割磷酸二酯键 限制性内切酶作用过程 点击播放 1、大肠杆菌的一种限制酶（EcoRⅠ)能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开形成黏性末端。 2、SmaⅠ能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切割形成平末端 。 常见的两种限制酶 SmaⅠ 平末端　　　平末端 　 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 A T G C A T G C 连接酶连接磷酸二酯键 DNA连接酶的作用过程： 二、分子缝合针——DNA连接酶 T 磷酸二酯键 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 A