生化12DNA生物合成技术总结.ppt

DNA半保留复制模型 二、双向复制 (bidirectional replication) 原核生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉(replication fork) 。 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase, DDDP) 简称：DNA-pol DNA-po l Ⅲ 同时合成领头链和随从链 3. DNA-pol的核酸外切酶活性和及时校读 真核生物每个染色体是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活。 复制的起始需要DNA-polα和polδ参与。还需拓扑酶和复制因子 (replication factor, RF)。 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。 端粒酶催化作用的爬行模型 1. 原核生物基因是环状DNA，双向复制的 汇合点就是复制的终止点。 ori ter 82 32 （三）复制的终止 2. 领头链上的RNA引物被RNA酶水解后， 由DNA pol I 催化，由新合成链提供 3?-OH补齐。 5? 5? 5? RNA酶 OH P 5? DNA-pol Ⅰ dNTP 5? 5? P ATP AMP+PPi 5? 5? DNA连接酶 3. 随从链上不连续性片段的连接 （一）复制的起始 二、真核生物的DNA生物合成 领头链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 5? 3? 3? 5? 随从链 引物 核小体 （二）复制的延长 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的 连接。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA 引物，去除后留下空隙。 （三）复制的终止 5? 3? 3? 5? 5? 3? 3? 5? + 5? 3? 3? 3? 3? 5? 5? 5? 染色体复制危机 反转录和其他的复制方式 Reverse Transcription and Other DNA Replication Ways 第四节 反转录酶 (reverse transcriptase) 反转录 (reverse transcription)现象 逆转录酶 一、反转录病毒和反转录酶 又称为逆转录酶，为依赖RNA的DNA聚合酶， (RNA-dependent DNA polymerase, RDDP) 反转录酶是多功能酶，有三种酶活性： 1. 反转录活性：即以RNA为模板合成DNA 2. RNase活性：水解RNA:DNA中的RNA 3. DNA pol活性：以DNA为模板合成DNA 反转录病毒细胞内的逆转录过程 RNA 模板 反转录酶 DNA-RNA 杂化双链 RNA酶 单链DNA 反转录酶 双链DNA 反转录酶 A AA A T T T T AAAA SI核酸酶 DNA聚合酶Ⅰ 碱水解 T T T T 分子生物学研究可应用反转录酶，作为获取基因工程目的基因的重要方法之一，此法称为cDNA法。 以mRNA为模板，经反转录合成的与mRNA碱基序列互补的DNA链。 试管内合成cDNA cDNA ?complementary DNA? 二、反转录研究的意义 反转录酶和反转录现象，是分子生物学研究中的重大发现。 反转录现象说明：至少在某些生物，RNA同样兼有遗传信息传代与表达功能。 对反转录病毒的研究，拓宽了20世纪初已注意到的病毒致癌理论。 端粒帽 染色体 端粒帽 端粒帽 端粒DNA 端粒结合蛋白 三、端粒酶 端粒(telomere) —指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构 对外: 抵御核酸酶等外界 因素的袭击 保护染色体结构和功能的完整性 染色体 对内: 染色体DNA的 末端复制问题 功能 维持染色体的稳定性 维持DNA复制的完整性 三、复制的保真性 (fidelity) 1. 遵守严格的碱基配对规律 A T G C 2. 聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能 DNA pol 靠其大分子结构协调非共价(氢键)与共价键(磷酸二酯键) 的有序形成。 嘌呤的化学结构能形成顺式和反式构型，与相应的嘧啶形成氢键配对时，嘌呤应处于反式构型。 DNA pol III 在催化磷酸二酯键形成之前完 成对碱基的选择；对反式嘌呤核苷酸的亲和 力较顺式的大。 A：DNA-pol Ⅰ的外切酶活性切除错配碱基；并用其聚合活性掺入正确配对的底物。 B：碱基配对正确，DNA-pol不表现活性。 解链酶类： 解螺旋酶 拓扑异构酶 单链DNA结