脾细胞对胰岛β细胞功能影响体外的研究.pdfVIP

中文摘要 脾细胞对胰岛p细胞功能影响的体外研究 摘 要 目的：已有的研究表明，胰岛p细胞功能受多种因素的 调控，以适应不同生理及病理状况下的需求。先后发现许多 因素对胰岛p细胞的功能具有调节作用，如营养物质、激素 和生长因子等。近年来的研究提示脾也是影响胰岛p细胞功 能的一个重要因素。有临床资料分析指出，糖尿病在部分胰 腺及脾切除患者比单纯部分胰腺切除患者具有更高的发生 率。在不同糖尿病小鼠模型的胰岛移植的研究中，表明外源 性脾细胞灌注有助于糖尿病小鼠胰岛p细胞群扩大。本研究 从细胞水平观察脾细胞对胰岛的增殖和胰岛素分泌功能的 and 影响：并通过分析胰十二指肠同源盒基因．1(pancreatic duodenal 脾细胞对胰岛p细胞的功能影响。 方法：采用Dextran密度梯度离心法分离纯化SD大鼠 胰岛，同时分离脾细胞。实验分为对照组(单纯胰岛培养组)、 统培养。在培养的第1、3、5、7天收集胰岛，用Cell Counting Kit．8(CCK．8)试剂盒通过酶标仪测定吸光度值，了解脾细胞 对胰岛增值的影响；用间接放射免疫法测定葡萄糖刺激胰岛 素的分泌量并计算胰岛素刺激指数(SI)，了解脾细胞对胰岛 素分泌的影响；用Trizol提取胰岛总RNA，逆转录．聚合酶链 增产物进行琼脂糖凝胶电泳，在UV透射反射分析仪下观察 中文摘要 扩增条带，在凝胶成像系统中成像并分析扩增条带的灰度。 示。从而从分子水平探讨脾细胞对胰岛功能的影响。 结果： 1胰岛的分离和纯化 大鼠胰腺经胶原酶V消化和DestranT40纯化液纯化 后，平均每只大鼠可获得胰岛572+78个，纯度高达92％以 上。AO／PI染色后，可见绝大部分胰岛呈现绿色荧光，活胰 岛比率大于90％。 2体外脾细胞对胰岛增值的影响 在培养的第1、3、5、7天，脾细胞和胰岛共培养组中 0-J：0．03 0．201+0．028、0．423+0．037、0．411和0．297+0．043。在 共培养组第l天的吸光度值与对照组相比，差异不明显，无 度值分别与对照组相比，具有显著差异(P0．01)。 3体外脾细胞对胰岛素分泌的影响 在葡萄糖刺激胰岛素分泌的实验中，在高糖刺激下，共 IU／m1) 培养组在培养的第1、3、5、7天的胰岛素分泌量(1a 10．925+0．328、8．935+0．41 分别为5．293+0．221、 5和 对照组和共培养组的胰岛素分泌量无统计学差异(PO．05)； 但在培养的第3、5、7天，共培养组的胰岛素分泌量与对照 组的相比，具有显著差异(PO．01)，尤其是在培养的第3天。 中文摘要 在培养的第1、3、5、7天，脾细胞和胰岛共培养组中 1、 对照组和共培养组的SI相比，无统计学差异(PO．05)；但在 培养的第3、5、7天，共培养组的SI与对照组的SI相比， 具有显著差异(P0．01)，尤其是在培养的第3天。 4体外脾细胞对胰岛的PDX．1基因的表达 mRNA，扩增产物通 RT-PCR分别扩增PDX．1和13-actin 过琼脂糖凝胶电泳得到两个片段，分别为PDX．1(202bp) 0．210+0．048，O．71 具有统计学差异(P0．01)。但在培养的第l天，对照组和 异(PO．05)。 结论： 在脾细胞与胰岛共同