UCH-L3在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株中表达.pdfVIP

UCH-L3 在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株 1 中的表达 1 2* 3 2 2 2 张竹青 ，唐建武 ，孙成荣 ，王波 ，张宏颖 ，赵志英 1.大连市中心医院病理科，辽宁大连（116033 ） 2.大连医科大学病理学教研室，辽宁大连（116027 ） 3.大连市第五人民医院肿瘤科，辽宁大连（116021 ） E-mail ：zzqdl_2004@126.com 摘 要: 背景与目的：转移是导致大多数肿瘤患者死亡的主要原因，肿瘤转移机制及防治 已成为当今重要的研究课题。Hca-F 和Hca-P 是一对高度同源且淋巴道转移能力显著不同的 小鼠腹水型肝癌细胞，其中Hca-F 为高转移细胞株，Hca-P 为低转移细胞株。UCH-L3 属泛 素C-末端水解酶家族，泛素系统参与细胞周期、增殖及凋亡等生理病理过程。UCH-L3 与肿 瘤的关系研究甚少，目前尚未见有其与肿瘤转移相关联的报告。本研究观察UCH-L3 基因编 码蛋白在小鼠腹水型肝癌高、低淋巴道转移株（Hca-F、Hca-P ）中的表达水平，分析它在这 两个细胞株中表达的关系及意义，以进一步探讨UCH-L3 基因在肿瘤转移过程中的作用及相 关的分子病理学机制。方法：以Hca-F 和Hca-P 为研究对象，采用免疫细胞化学、Western Blot 和流式细胞仪检测UCH-L3 蛋白在Hca-F 和Hca-P 两细胞株的表达。结果：免疫细胞化学显 示，UCH-L3 蛋白在Hca-F 、Hca-P 细胞中均主要定位于胞浆；Western Blot 及流式细胞仪结 果均显示UCH-L3 蛋白在Hca-F 中的表达量明显低于Hca-P （P0.01 和P0.001 ）。结论： UCH-L3 蛋白可能与肿瘤淋巴道转移相关，为研究肿瘤的淋巴道转移机制奠定了基础。 关键词：肝肿瘤；淋巴道转移；UCH-L3 蛋白 中文分类号：R730 1. 引言 转移是恶性肿瘤的最重要标志和最本质表现，也是肿瘤所致患者死亡的最主要原因。早 期发现并防止肿瘤转移是改善病人预后的重要手段。因此，肿瘤转移机制及防治已成为当今 肿瘤研究领域的热点。Hca-F 和 Hca-P 是两株本实验室自行建立的肿瘤转移机制实验模型。 它们是一对高度同源的来自同一小鼠肝癌细胞克隆的不同亚克隆，经 615 小鼠局部皮下注射 后，特异地向引流淋巴结转移。其中 Hca-F 为高转移细胞株，在 615 小鼠体内淋巴结转移率 70%，Hca-P 为低转移细胞株，转移率30%[1~3] 。UCH-L3 是泛素 C-末端水解酶家族(UCHs) 成员之一，泛素系统作用于细胞的许多过程如细胞周期、增殖、凋亡、膜蛋白细胞内摄作用 和信号转导等[4,5] 。本研究采用细胞免疫化学、Western Blot 和流式细胞术检测了 UCH-L3 蛋 白 在 Hca-F 和 Hca-P 中的表达情况，进一步探讨UCH-L3 表达与肿瘤淋巴道转移的关系， 为解析肿瘤淋巴道转移机制提供新思路。 2. 材料与方法 2.1 材料 高淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细胞（Hca-F ），低淋巴道转移力小鼠腹水型肝癌细 胞（Hca-P ），由大连医科大学病理教研室建株并保存。近交系 615 小鼠，雄性，体重 18~22g， 由大连医科大学病理教研室繁育并提供[辽实动质字（2000 ）028 号] 。主要试剂 UCH-L3 多 1本课题得到教育部博士点基金（高低淋巴道转移力小鼠肝癌细胞株的比较蛋白组研究，20040161005 ）和 国家自然科学基金）的资助。 - 1 - 克隆抗体购自 SANTA CRUZ 公司。 2.2 细胞培养 将液氮冻存的 Hca-F 和 Hca-P