实验6 血清甘油三酯与胆固醇的测定20151109技术总结.pptxVIP

实验六 血清甘油三酯与胆固醇的测定 酶法测定血清中的甘油三酯 一. 目的要求 了解血清甘油三酯酶法测定的原理 了解血清甘油三酯测定的临床意义 掌握酶标仪测定法的原理和操作 二．实验原理 血清甘油三酯的测定是血脂分析的重要内容之一。目前，国内多数医院采用酶法测定。酶法又分为：一步终点比色法和两步终点比色法。两步法的主要优点是消除了游离甘油的干扰。 脂蛋白脂肪酶（LPL）可将甘油三酯水解成甘油和脂肪酸。甘油在甘油激酶催化下，生成磷酸甘油，后者在磷酸甘油氧化酶（GPO）催化下，生成磷酸二羟丙酮和H2O2。 H2O2在过氧化物酶（POD）催化下与4-氨基安替比林（4-AAP）及ESPAS（3-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯胺）反应生成紫色醌亚胺染料。形成的醌亚胺染料色泽强度与样品中甘油三酯的含量成正比。测定标准样品溶液和待测血清样品反应生成的醌亚胺染料吸光度（A）值，即可求出待测血清样品中甘油三酯的浓量。 二．实验原理 反应如下： 甘油三酯（TG）＋3H2O 甘油＋ATP 甘油-1-磷酸＋O2 H2O2＋ 4-AAP ＋ ESPAS 目前，TG测定试剂盒多根据以上原理配制，用一步终点法测定。 甘油＋3RCOOH（脂肪酸） 甘油-1-磷酸＋ADP 磷酸二羟丙酮＋H2O2 醌亚胺 染料＋ 4H2O 三．器材及试剂 1．器材： 酶标仪，酶标板，37度恒温箱，移液枪。 2. 试剂： 一步法：Tris-HCl缓冲液（pH7.6，浓度为150mmlo/L），LPL或脂肪酶（3000u/L），甘油激酶（GK）（250u/L），ATP（0.5mmol/L），磷酸甘油氧化酶（GPO）（3000u/L），过氧化物酶（POD；辣根）（1000u/L），胆酸钠（3.5mmol/L），硫酸镁（17.5mmol/L），4-氨基安替比林（4-AAP）（1mmol/L），4-氯酚（3.5mmol/L），Triton X-100（0.1g/L）。 四．操作步骤 取酶标条1个（每个样品2个重复），按下表操作： 试剂（ul） 空白管 标准管 测定管 蒸馏水 3 － － 2.26mmol/L标准品(TG) － 3 － 样本 — — 3 酶试剂（工作液） 300 300 300 37℃保温5min，空白调零，550nm处测定各孔A值。 五．计算 （标准液浓度=2.26mmol/L） （mmol/L） 正常参考值：0.56~~1.7mmol/L，老年约为：2.26mmol/L。 美国国家胆固醇教育计划对空腹TG水平分解线的修订意见为（1993年）： TG正常：2.3mmol/L TG增高的比缘：2.3~4.5mmol/L 高TG血症：4.5mmol/L 胰腺炎高危：11.3mmol/L 六．注意事项 试剂出现红色不能再用，试剂空白吸光度A550nm0.05； 两步法37℃ 4分钟能完全排除游离甘油； GPO纯度不高时，因其它氧化酶的存在而产生额外的H2O2，使得结果偏高； 温度控制、吸量的准确度对结果影响较大； 甘油三酯增高常见于肥胖、糖尿病、肾病综合症、糖原沉积症、高血压、冠心病等，也随年龄而上升。降低多见于甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能低下、肝功能严重低下。 七．临床意义 血脂是血浆所含脂类的统称 血浆所含脂类统称血脂，包括：甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯以及游离脂酸。 外源性——从食物中摄取 内源性——肝、脂肪细胞及其他组织合成后释放入血 定义： 来源： 血脂含量受膳食、年龄、性别、职业及代谢等的影响，波动范围很大。 七．临床意义 十二指肠下段及空肠上段。 饮食脂肪在小肠被吸收 吸收部位： 吸收方式： 七．临床意义 消化吸收和内源性合成的脂酸，以游离的形式存在较少，大多数以酯化的形式存在于甘油三酯之中而存在于体内。 （二）甘油三酯的主要作用是为机体提供能量 （一）甘油三酯是脂酸的主要储存形式 1. 甘油三酯是机体重要的能量来源 2. 甘油三酯是机体的主要能量储存形式 男性：21%，女性：26％ 1g TG = 38kJ 七．临床意义 （三）甘油三酯是3分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。甘油三酯是人体内含量最多的脂类，大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量。甘油三酯大部分是从饮食中获得的，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成，在脂肪组织中贮存。 （四）甘油三酯增高常见于肥胖、糖尿病、肾病综合症、糖原沉积症、高血压、冠心病等，也随年龄而上升。降低多见于甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能低下、肝功能严重低下。 八．思考题 简述酶法测定甘油三酯的原理。 正常人空腹血清TG浓度是多少？说明TG的测定的临床意义。 酶法测定血清中的胆固醇 一. 目的要求 了解血清胆固醇氧化酶法测定的