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细胞分析技术概述 (Cell Analysis Technology) 姓名：XXX 学号：XXX 细胞分析意义 细胞分析流程 汇报内容 细胞是生命活动的基本单位,是独立生存的生命实体,是展现活的生命状态全部特点的最小单位,是组成生物体的结构和功能的基本单元，也是无数鉴定和了解生命的基本生化生理过程研究的起点。 分析检测细胞的各种变化,从细胞中提取生命的信息,搞清单细胞中各种化学物质的定性、定位、定形、定量以及结构的变化等都具有十分重要的学术意义和应用价值。 细胞分析意义 细胞分析意义 细胞分析流程 汇报内容 细胞分析流程( Cell Analysis Workflow) 1 细胞培养( Cell Culture)： (1)细胞系培养( Cell Line Culture) (2)原代细胞培养( Primary Cell Culture) (3)干细胞培养(Stem Cell Culture) (4)诱导多能干细胞培养( iPSC Culture) 2 细胞分离 (Cell Isolation) 3 细胞计数 (Cell Counting) 4 细胞转染 (Cell Transfection) 5 细胞成像 (Cellular Imaging) 6 流式细胞分析技术 (Flow Cytometry) 细胞分析解决方案 ( Cell Analysis Workflow) 1 细胞培养——细胞的原代培养  将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 1 细胞培养 2 细胞分离  细胞分离：将组织材料分散制成细胞悬液后,从中获取目的细胞的过程。 细胞分离技术包括：离心技术、流式细胞术和细胞电泳。 离心：是研究如细胞核、线粒体、高尔基体、溶酶体和微体，以及各种大分子基本手段； 流式细胞术：是对单个细胞进行快速定量分析与分选的一门技术； 细胞电泳：是指在一定PH值下细胞表面带有净的正或负电荷，能在外加电场的作用下发生泳动。 2 细胞分离——离心技术 3 细胞计数——细胞计数板  实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3?而 1ml=1000mm3 细胞计数板 3 细胞计数——细胞自动计数仪  4 细胞转染 定义： 细胞转染技术是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。 方法： 1.脂质体转染法 阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型:cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。 2.电穿孔转染法 电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。 3.病毒感染 对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染，此法可以快速100%感染，检测成功率高。 4 细胞转染——脂质体转染法 活体动物体内成像技术是指应用影像学方法，对活体状态下的生物过程进行组织、细胞和分子水平的定性和定量研究的技术。 活体动物体内成像技术主要分为可见光成像 (optical imaging)、核素成像（radio-nuclear imaging）、核磁共振（magnetic resonan