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Lipin家族的研究进展 报告人：木木木 时 间：2014.1.16 几种分子遗传标记技术简介 动物遗传标记课程作业 动物遗传标记课程作业 分子遗传标记概述 1 主要分子标记技术 4 分子遗传标记优越性 2 分子遗传标记分类 3 几种分子标记的比较 5 分子遗传标记概述 20世纪70年代以来，随着分子生物学的发展，相继建立了RFLP、RAPD、AFLP、SNP、SSCP等分子遗传标记检测技术。 分子遗传标记（Molecular Genetic Markers）是以个体遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标记，是 DNA 水平遗传多态性的直接的反映。 动物遗传标记课程作业 多为共显性； 在生物发育的不同阶段，不同组织的 DNA 都可用于标记分析； 表现为中性，不影响目标性状的表达； 基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的； 检测手段简单快捷，易于实现自动化。 动物遗传标记课程作业 分子遗传标记的优越性 分子遗传标记的分类 动物遗传标记课程作业 Southern杂交为核心的分子标记，如RFLP 其它分子标记技术，如mtDNA PCR技术为基础的分子标记，如RAPD 核酸序列为基础的分子标记，如SNP 分子 标记 主要的分子遗传标记 原理：用限制性内切酶切割基因组DNA后，基因组DNA在检测区域内发生了重排、插入、缺失或点突变，导致酶切位点发生改变，从而形成了大小不等、数量不同的酶切片段，当这些片段通过凝胶电泳时就形成不同的带，用分子探针杂交并利用放射自显影成像时，不同程度的RFLP谱带表示其多态性。 动物遗传标记课程作业 1、RFLP （Restriction Fragment Length Polymorphism） 限制性片段长度多态性 动物遗传标记课程作业 RFLP的优点 样品纯度要求较高，样品用量大； 多态信息含量低； 步骤繁琐、工作量大、成本较高。 动物遗传标记课程作业 较高的可靠性； 标记数目是无限的； 标记为共显性； 标记之间无干扰； 不受年龄性别以及外界环境的影响。 RFLP的缺点 RFLP的应用 分子水平上选择目的性状 进行品种或品系遗传纯度的测定 改良回交育种技术 生物进化和分类 疾病诊断方面的应用 特别适应于构建遗传连锁图 动物遗传标记课程作业 2、AFLP?(Amplified?Restriction?Fragment?Polymorphism)  扩增片段长度多态性 : 原理：基因组DNA经两种限制性内切酶酶切，形成分子量大小不等的随机酶切片段，将特定的人工合成的短的双链接头连在这些片段的两端，形成一个带接头的特异片段，用含有选择性碱基的引物对摸板DNA进行扩增。扩增产物经放射性同位素标记、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，然后根据凝胶上扩增产物的多态性来检出多态性。 动物遗传标记课程作业 动物遗传标记课程作业 AFLP的优点 动物遗传标记课程作业 多态性丰富且清晰可辨，一次AFLP分析可检测到100~150个标记；被认为是指纹图谱技术中多态性最丰富的一项技术； 可靠性好，重复性高； DNA需要量少； 引物在不同物种间是通用的； AFLP分析的扩增片段较短（30-700bp)，分辨率高。 AFLP的缺点 对DNA模板质量要求高，对其浓度变化不敏感； 显性标记，只能表明目的条带的有无，不能区分纯合子和杂合子； 操作复杂，耗时，成本高。 AFLP的应用  动物遗传标记课程作业 遗传图谱的构建； 基因标记及定位； 种及种下阶元的分类鉴定； 遗传距离及杂种优势的利用； 遗传多样性和系统进化的研究。 3、SSCP（Single Strand Conformation Polymorphism) 单链构象多态性 单链构象多态性检测是一种基于单链DNA构象差别来检测点突变的方法。 原理：单链DNA分子内的相互作用力使其呈现 复杂的空间折叠构象，当有一个碱基发生改变时，其空间构象发生变化，这些空间构象存在差异的单链DNA分子在凝胶中受排阻大小不同。因此，通过电泳可以将构象上有差异的分子分离开，形成了单链构象多态性。 动物遗传标记课程作业 动物遗传标记课程作业 动物遗传标记课程作业 SSCP的优点 操作简便，实验步骤少，周期短； 具有高的灵敏性，仅单个碱基差异亦可检测出来，拓展了检测范围； 能得到更多的图谱信息，更详细的分型结果。 SSCP的缺点 只能作为突变检测方法，要确定突变的位置和类型，还需进一步测序； 受外界影响较大，电泳条件要求较严格； 易造成漏检。 SSCP的应用 动物遗传标记课程作业 基因点突变的监测 大量样本的筛选 cDNA的筛查 检测