脂类细胞化学—苏丹Ⅲ染色.pdf

细胞生物学实验报告 山东大学实验报告 2011 年4 月13 日 姓名 张行润 系年级 2009 级生科4 班 学号 200900140177 同组者 张少华 科目 细胞生物学实验 题目脂类细胞化学—苏丹Ⅲ染色 仪器编号 105 一、 实验目的 熟悉并掌握苏丹Ⅲ染色的原理及步骤 二、 实验原理 脂肪是由甘油和脂肪酸组成的三酰甘油酯，其中甘油的分子比较简单，而脂肪酸的种类和 长短却不相同。脂肪酸分三大类：饱和脂肪酸、单不饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸。脂肪不溶 于水而易溶于乙醚、氯仿等非极性溶剂中的物质 脂肪细胞体积大，一般核扁，在边缘，细胞呈空泡状。脂肪细胞常见的有两类：单泡脂肪 细胞 〔左〕和多泡脂肪细胞 〔右〕 图1：两类脂肪细胞结构示意图 单泡脂肪细胞，细胞中央有一大脂滴，胞质呈薄层，位于细胞周缘，包绕脂滴。 多泡脂肪细胞内散在许多小脂滴，线粒体大而丰富，核圆形，位于细胞中央。 脂类染色使用最广泛的染料是苏丹染料，最常用的有苏丹Ⅲ，苏丹Ⅳ，苏丹黑及油红O 等。脂肪被染色，实际上是苏丹染料被脂肪溶解吸附而呈现染料的颜色。 苏丹Ⅲ(Sudan Ⅲ) 能使木栓化,角质化的细胞壁及脂肪、挥发油、树脂等染成橙黄色。组织中脂质在液态或半液 态时，对苏丹染料着色效果最好。根据这一原理，适当提高温度（37℃-60℃）对组织切片染 色效果是有好处的。 三、 实验器材 解剖盘、解剖剪、镊子、盖玻片、载玻片、光学显微镜等 四、 实验材料 甲醛钙溶液、70%乙醇溶液、蒸馏水、苏丹三染液、小鼠一只等 五、 实验操作 1. 断头法处死小鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，用镊子提起小肠将盖玻片紧贴于肠系膜，用 解剖剪连同盖玻片和其上黏着的肠系膜一同取下，反扣于已滴加甲醛钙的载玻片上，固定 20min； 1 细胞生物学实验报告 2. 吸蒸馏水滴入载玻片与盖玻片之间冲洗，用滴管不断吸去液体以除去固定液； 3. 用70%乙醇溶液代替蒸馏水重复步骤2 的操作，再进行一次冲洗； 4. 用苏丹三染色30min； 5. 吸去溢出染液，擦净盖玻片表面及周边，放置于显微镜下观察。 六、 注意事项 1. 肠系膜的选取：最好选带有血管的且周围脂肪组织不要太厚太多的肠系膜，因为血管周围 会有脂肪组织给予保护，易于观察；而太多的脂肪组织致使显微镜下脂肪细胞叠加，给观 察带来困难； 2. 肠系膜比较薄因而比较容易破碎，在用镊子选取的过程中要小心，以免将肠系膜扯破，制 片时应用载玻片和盖玻片将肠系膜完全撑开，便于染色等操作和观察； 3. 染色时间不宜太短，因为时间太短导致染色不明显 七、 实验结果 (一) 实验结果 脂肪细胞呈圆球形，内充满橘红色脂类物质，细胞外也有散在的橘红色圆脂肪滴，脂肪细 胞中的脂质和脂肪滴中的脂质有明显的区别：前者有一定结构，比较规则；后者没有规则的结 构，显得比较明亮，形状一般为圆球形，比较集中。 (二) 实验图片 图2：脂肪细胞苏丹三染色结果图 八、 分析总结 (一) 结果分析 1. 在苏丹三染色过程中，因苏丹三具有脂溶性，易穿过细胞膜从而进入脂肪细胞内与脂肪反 应而显色； 2. 选取肠系膜做苏丹三的染色实验是因为肠系膜上具有大量脂肪细胞，且肠系膜很薄很透明， 易于观察； 3. 选取肠系膜时选择血管周围的膜进行观察，所得实验结果较好，即有脂肪细胞又不至于太 厚。 (二) 误差分析 2 细胞生物学实验报告 实验中至少应有一下几点可影响实验结果： 1. 肠系膜被扯破或未被充分伸展而导致一定程度的褶皱，观察到的脂肪细胞不止一层， 导致细胞观察不清晰，效果不理想； 2. 染色时间不合适，时间太短会使得脂肪细胞中的脂肪还没有完全被染色，导致实验现 象不明显；染色时间也