志贺氏菌实时荧光PCR检测试剂的研制.pdf

现代食品科技 ModernFoodScienceand Technology 志贺氏菌实时荧光PCR检测试剂的研制 邱杨，唐丽霞，赵丽，刘建丽 (东莞出入境检验检疫局，广东东莞523072) 摘要：根据志贺氏菌ipaH基因序列设计了特异引物和探针，并对1细酶、M矿帛引物探度等反应条件进行了优化．结果表明用 实时荧光PCR法检测志贺氏茵具有特异．|生强、灵敏度高等突出的优点，可应用于进出口检验检疫、食品安全检删、疾病控制等领域． 关键词：志贺氏茵；#,aFI基因序列；实时荧光PCR 中图分类号：C178；文献标识码：A；文章篇号：1673-9078(2008)11．1151-04 ontheReal—TimePCR forDetectionof Study Reagent Shigella Jianli Li-xia,ZInoLI’LIU QIUYang,TANG and and ImportExportInspectionQuarantine 523072，China) fDongguan Bureau,Dongguan tothe frame of and we孵 of A如耐耐：AccorcIjngopenreading soquen∞ofShigella-自vaHgone．severalcouplesspecificpriIlaerprobe reaction Thismethodwas The∞删瑚删∞s and condition designed ofprierpID；bq嘁Taqenzyme出’鞠鹃and w讹ol，timized sp刮ic： and willbe usedinareas and and anddiseasecontrol sensitive,andwidely ofi加ponexportiDspectionquaranfne，foodsafely time PCR Keywords：砌fge妇卿．；i硼gene；real 志贺氏菌($hfgeHaspp．)为革兰氏阴性杆菌，长 SDS、NaCl、苯酚、氯仿、异丙醇、无水乙醇、 约2~3岬，不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，有菌毛ll一。 Free 由它引起的急慢细菌性痢疾共有6种类型，并主要通过 为分析纯。 消化道途径传播【3’41。全世界每年有16470万例感染志1．2方法 贺氏菌的病例，有110万人因此而死亡，并且其中69％ 1．2．1 引物和探针的设计与合成 是不满5岁的儿童【5刀。因此对志贺氏菌的检测也便成 杠1日基因是志贺氏菌的特异序列，该基因决定志 为控制痢疾发生主要手段之一，目前志贺氏菌的检验 贺氏菌对大肠粘膜的上皮细胞侵的袭能力，以批村 的检测方法分为生化法、免疫学方法及分子生物学方 基因为检测靶基因可以检测出全部四种志贺氏菌和少 法【8】，但是这些检测方法周期长、工作量大，而且灵 敏度低，特异性差，不能满足现代临床检验的需求。