生物光子学5-05教程.ppt

* * 出射光斑（单阶模） 光子晶体光纤超连续谱发生装置 主要技术指标: 光谱覆盖范围：500～1300nm； 平均输出功率：150～200mW。 PCF端面 5.10 非线性光学成像技术 * * 超连续光谱展宽效果 （a）飞秒激光脉冲泵浦光子晶体光纤获得的超连续谱的光谱分布； (b)通过800nm长波通滤光片滤除蓝移的光谱成份后的超连续谱的光谱分布。 5.10 非线性光学成像技术 * 二甲基亚砜 CH3-CH3-SO （a）时间延迟为0ps时的CARS信号* （b）时间延迟为1.5ps时的CARS信号* 5.10 非线性光学成像技术 * 苯甲腈 Lee Y J et al, APL 2008 92:041108 实验结果 5.10 非线性光学成像技术 * 获得不同摩尔浓度的苯甲腈和乙醇混合溶液的拉曼光谱 苯甲腈:乙醇=1:5 5.10 非线性光学成像技术 * 苯甲腈:乙醇=1:1 氨基乙酸水溶液 5.10 非线性光学成像技术 * * 牛血清白蛋白（BSA） 5.10 非线性光学成像技术 * 5.1 光学成像 5.2 光学显微技术 5.3 荧光显微技术 5.4 激光扫描共聚焦显微技术 5.5 多光子激发荧光显微技术 5.6 全内反射荧光显微技术 5.7 荧光共振能量转移成像技术 5.8 荧光寿命成像显微技术 5.9 光学相干层析成像技术 5.10 非线性光学成像技术 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 本 章 内 容 * 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 多功能成像： 把各种生物成像方法组合使用，各种技术的集成是生物成像的新兴领域。 一些现代的共聚焦/多光子显微镜可以提供受激荧光、荧光寿命成像和四维成像（在三维基础上加上频谱成像）。有的可以改进成各向异性成像、拉曼成像、谐波成像。 * * 4Pi成像：一种新兴的高分辨率生物成像技术。利用相干光源在样品上产生驻波，限制了样品的发射容积。 采用双光子4Pi成像，可以同时获得横向和轴向的高分辨率。 复合显微镜：将近场和远场集成在一起来增强成像的动态范围。在同一设备的内部进行近场和远场之间的切换，既可以获得高分辨率小区域范围的扫描，也可以获得大区域远场图像。 目前已有组合了近场显微家和共聚焦显微镜的商用设备。 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 * * 小型显微镜：当前生物成像研究正利用MEMS技术来发展小型成像设备，另一目标是开发基于导管的人体内组织成像。内窥共聚焦、内窥多光子、光纤探头等。 超衍射极限显微成像 结构光照明（SI）显微成像 STED显微（stimulated emission depletion microscopy，受激发射耗尽显微术) PALM（ Photoactivated localization microscopy，光敏定位显微术） STORM 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 * * 采用球面波前激发荧光或采用球面波前激发+收集荧光，轴向分辨率可提高7倍，可使 双光子4Pi显微术已经应用于活细胞，轴向分辨率达到80nm。 4Pi Microscopy 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 * * STED microscopy 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 * * Axial resolution increase provided by STED-4Pi (b,d) over confocal microscopy (a,c). STED-4Pi microscopy 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 * * 结构光照明：Structured Illumination，SI SI：一般是指用光栅产生规则图案的结构光的方法。SIM可获得超衍射极限空间分辨率 普通的荧光显微镜（左）和SI（右）的OTF对比 x z 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 * * 斑马鱼胚胎 鼠肾脏切片 鼠小肠切片 成像效果显示 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 * 传统 结构光照明 脑皮层星形胶质细胞 对50nm 荧光珠的成像 (a)传统显微术 (b)经滤波的传统显微术 (c)线性结构光照明 (d)饱和结构光照明 SPEM与传统显微技术及线性结构光照明的成像结果对比 5.11 生物光子学成像技术的发展趋势 * SPEM（saturated pattern excitation microseopy） 饱和结构激发显微技术 饱和结构光照明是另一种获得超高分辨率的方法，除了采用不同的光源， SPEM和线性结构光照明显微镜在结构上完全一样。 * Quiz 5 非线性光学成像利用了光和组织相互作用的______效