自身抗体的检测-课件.pptVIP

自身抗体的检测 及应用  抗核抗体（ANA）的检测与临床应用 抗核抗体的定义 传统定义：针对细胞核成分抗原总称。 广义定义：针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解不再局限于核成份，而是指核质和核蛋白的总称。 ANA测定原理和方法： 间接免疫荧光法（IIF):现多以Hep-2细胞（人喉癌上皮细胞）为底物（Ag)，其以核质丰富而极大地提高了ANA检测的阳性率和滴度。 是系统性红斑狼疮（SLE）的标准筛选试验。 我们实验室采用欧蒙荧光检测系统，将1:100作为血清起始稀释度，所以如果是低滴度的1:100阳性，只能视为一个临界可疑值，临床意义不大。 ANA作为自身免疫性结缔组织病的筛选试验必须强调高滴度。 ANA的靶抗原分布 整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期蛋白等。 ANA检测的临床意义 ANA可见于多种自身免疫性疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织疾病的诊断，病情判断和疗效观察的指标 已证实ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值。ANA的靶抗原为细胞核内的不同生化成份，包括核酸、细胞核蛋白和核糖体蛋白。在不同疾病中，特别是风湿性疾病，其抗体谱有一定的特意性。在炎症性风湿病中ANA阳性率在20%-100%之间，其中类风湿性关节炎中ANA阳性率最低，为20%-40%。所以，检测ANA对于不同类型风湿病意义重大。 ⑴ SLE活动性：占95%-100%， 非活动性：占80%-100%。 （2）药物诱导的SLE：占100%。 （3）混合性结缔组织疾病：占100%。 （4）其它风湿性疾病：占20%-50% （5）进行性系统硬化症：占85%-95%。 （ 6）多肌炎和皮肌炎：占30%-50%。 （7）干燥综合征：占70%-80%。 （8）慢性活动性肝炎：占30%-40%。 （9）溃疡性结肠炎：占26%。 其它 还可见于： 非结缔组织疾病中也可出现阳性；正常人（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，并且常表现为IgM型；高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病。 ANA（＋）的原因 风湿性疾病 SLE 多发性肌炎 干燥综合征 硬皮病 血管炎 RA 正常的健康人 女性＞男性，出现率随年龄而增加 风湿性疾病患者亲属 ？孕妇 SLE患者使用IIF法测定ANA阴性的一些解释 技术方面 临床方面 经皮质激素或免疫抑制剂治疗。 终末期肾病。 隐蔽ANA：与循环中免疫复合物结合，沉积于组织。 由于大量蛋白尿而从肾脏丢失。 ANA的荧光染色型别 细胞核： 核均质型（DNA、组蛋白和核小体等） 核颗粒型（Sm、uRNP、SS-A、SS-B、Ku、I和Ⅱ型周期蛋白） 核膜型（板层素、gp120等） 核仁型（SCL-70、PM-SCL、RNA多聚酶、原纤维蛋白等） 核浆点型（着丝点、核多点及核少点型） 细胞浆： 胞浆颗粒型（线粒体、Jo-1、核糖体等） 胞浆纤维型：波形蛋白、原肌球蛋白和肌动蛋白等 分裂期细胞阳性：纺垂体、中间体、中心体等 ANA筛查的方法 间接免疫荧光法（IIF） 基质组合为：HEP-2细胞 + 灵长类肝（猴） 核颗粒型：核粗颗粒型 抗核抗体染色类型 核仁型（nucleolar） 均质性 （ homogeneous ） ANA的 荧光类型 ANA试验的结果中一般会报告其分型，这些分型可能与某一特定的抗原反应活性相关。 抗双链DNA抗体（ds-DNA）的检测与临床应用 检测：测定抗ds-DNA以血鞭毛虫属的绿萤短膜虫为靶抗原基质，可联合使用HEp-2细胞及灵长类肝组织检测。 自身抗原：位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。 抗dsDNA抗体 荧光模式： 绿蝇短膜虫：动基体均质的或边缘亮度增强的荧光。 Hep-2细胞：细胞核的均质型荧光。 临床应用 抗双链DNA抗体（ds-DNA）是系统性红斑狼疮的特异性抗体，其阳性率因检测方法而异，在40-90%。但抗ds-DNA阴性并不能排除患有SLE的可能性。抗ds-DNA抗体具有预测价值，85%的出现抗ds-DNA抗体的健康人在五年内发展为SLE。已证实抗ds-DNA抗体参与SLE的病理过程，在疾病形成过程中，抗ds-DNA和其抗体形成的免疫复合物沉积在皮下毛细血管、肾和其他器官内，激活补体系统，从而导致组织损伤。 抗体水平与疾病活动度相关，随着疾病活动的控制，抗ds-D