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临床PCR检测的标准化 卫生部临床检验中心 李金明 标准化(standardization)的概念 Standard:文字 Standards:物质 Standardization: 通过对测定方法和检测程序的规范化，使测定结果的量值可溯源至同一标准物质或参考方法，从而使测定结果在不同方法、不同试剂及不同的实验间具有可比性。 标准物质、测定方法和检测程序标准化之间的关系 为什么要进行标准化? 通过标准化以改善实验室测定的准确度，从而提高不同的实验室间结果的可比性。 缺乏标准化，则不同试剂、不同方法、不同实验室间的测定结果就无法一致，没有可比性，也无法对一种方法、一种试剂进行适当的评价。 标准化的先决条件 检测物的同一性 标准品的同一性 标准化组织 世界卫生组织（WHO）生物学标准化专家委员会（The Expert Committee on Biological Standardisation, ECBS）：负责建立生物物质的国际标准及参比材料。 国家生物学标准和质控物研究所（National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC）： WHO通过其提供国际标准品。 一些区域和地区性组织 ：美国CDC、CAP、NIH 国际性科学协会：IFCC、国家临床实验室标准化委员会（National Committee of Clinical Laboratory Standardisation,NCCLS）以及美国和加拿大临床化学协会（American Societies for Clinical Chemistry and Canadian Societies for Clinical Chemistry and Canadian, AACC 和CSCC）等：组织编写一些临床检验的导则等文件 标准品和质控品（1） 可提供标准品的国际标准化组织有：WHO生物学标准化专家委员会（ECBS）、英国国家生物学标准和质控物研究所(National Institute for Biological Standards and Control,NIBSC)、美国CDC和CAP、国家卫生研究所（NIH）、IFCC等；国内有中国药品生物制品检定所、卫生部临床检验中心 标准品和质控品（2） 在美国临床PCR检验试剂方法用于临床必须有FDA批准；在德国监督机构为INSTAND；在国内试剂批准文号由SFDA负责。 仅使用标准品并不能保证PCR测定结果的可比性，但其在保证PCR测定质量中的重要性却是不可替代的。 标准品和质控品（3） 标准品和质控品的功能:可用作临床检测的校准物; 可用来评价试验的有效性;作为室内质控样本; 作为室间质评样本. 国际标准品分级:可分为第一,第二和第三等三个等级. 一级标准数量有限,可使用10-20年,是冻干品,内含载体蛋白. 一级标准可用来校准第二和第三级标准. 国际标准品(IS)中作为第一级标准, 二级标准可用来维持校准. 国内标准品分级：一级和二级。 标准品和质控品（4） 标准品的单位: 病毒核酸国际标准品均以IU/L表示。 有关标准品单位和溯源的问题 长度单位的确定和溯源举例 标准品定值的测定方法 :参考方法 决定性方法（Definitive method）: 是一个具有高精密度及没有系统偏差的参考方法。 参考方法:(Reference method）:应有低测定下限、不受非特异干扰及不与相关的化合物发生交叉反应，同时还应该容易得到。 为保持参考方法的有效性, 有必要建立一个参考实验室的网络. 国际单位(International Units)的由来 国际单位（International units, IU）定义: 国际标准的应用目的是为测定提供一个通用的标准单位, 使用相同的测定生物学单位来指定标准品或工作校准品的单位. 核酸检测国际标准 项目 研制者 发布年 编号 浓度 HBV DNA NIBSC 1999 97/746 106 IU/ml HCV RNA NIBSC 1997 96/790 105 IU/ml NIBSC 2005 96/798 105 IU/ml HIV-1 RNA NIBSC 1998 97/656 105 IU/瓶 HAV RNA NIBSC