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临床生化检验 吉大一院检验科 孙淑艳 教授 本次课的主要内容 .蛋白质代谢检查 .糖代谢检查 三 .离子测定 一 蛋白质代谢检查 (一)TP测定:方法、原理、操作、临床意义及注意事项 (二)ALB测定:方法、原理、操作、临床意义、注意事项 （一）TP测定 TP测定方法简介: TP测定时常利用蛋白质的一些特性,如重复的肽键结构;酪氨酸和色氨酸残基对酚试剂反应或紫外光吸收;与色素结合的能力;沉淀后的浊度;电泳的迁移率大小等来设计蛋白质的测定方法。经典和常见的方法分述如下： ①凯氏定氮法:是经典的蛋白质测定方法,准确性好、精密度和灵敏度高、是公认的参考方法。但操作复杂、费时,主要用于标准蛋白质的定值和对其他方法的校正。 ②双缩脲法：特异性高、准确度和精密度好，方法简便、显色稳定。虽然灵敏度不高，但能满足临床对血清TP定量测定要求，是临床测定血清TP的常规方法。 （一） TP测定 1. TP测定方法简介: ③酚试剂法：灵敏度高达双缩脲法的100倍，有利于检出微量蛋白质，较合适于单一蛋白质检测。 ④紫外分光光度法：利用蛋白质在280nm处有吸收峰的特点，常用于测定较纯的酶和免疫球蛋白。 ⑤染料结合法：常用氨基黑、丽春红、考马斯亮蓝、邻苯三酚红钼等，前三者主要用于蛋白电泳，邻苯三酚红钼可用于尿液和脑脊液中蛋白质的测定，简便快速、灵敏，但不同蛋白质结合力不一样，且试剂对比色杯有吸附作用。 ⑥化学比浊法：操作简便、灵敏度高，但影响浊度大小的因素较多，一般用于测定尿液、脑脊液等蛋白质含量较低的标本。 （一） TP测定 2.双缩脲法测定TP原理: 蛋白质中的肽键在碱性溶液中与2价铜离子作用生成稳定的紫红色络合物, 此反应和两个尿素分子缩合生成的双缩脲在碱性液中与铜离子作用形成紫红 色的反应相似,故称之为双缩脲反应。这种紫红色络合物在540nm处有明显吸 收峰,,吸光度在一定范围内与血清总蛋白含量成正比,经与同样处理的蛋白 质标准液比较,即可求得蛋白质含量。至少含2个-CONH-基团才能与Cu2+络 合，故氨基酸及二肽无反应，三肽以上才能反应. 碱性 蛋白质﹢铜离子 → 紫色络合物 试剂:成品试剂(液体单一试剂)。 双缩脲试剂含有：硫酸铜、酒石酸钾钠、碘化钾、NaOH 。 标准液:蛋白质含量：50g/L 、60g/L 仪 器 ：生化自动分析仪、分光光度计。 (一) TP测定 3.双缩脲法测定TP 操作: (1).生化自动分析仪法 按试剂说明书提供的参数编程测定。 (2).手工操作法: 混匀，37 ℃10min，波长540nm处比色，蒸馏水调零，测各管 吸光度。 计算 (一)TP测定 4.双缩脲法测定TP: 临床意义: 正常成人TP：60-80g/L (1) TP降低:见于蛋白合成障碍(肝功严重受损时，蛋白合成减少，以ALB降低最显著)、蛋白丢失增加(严重烧伤,大量血浆渗出;肾病综合征;溃疡性结肠炎)、营养不良或消耗增加 、血浆稀释(如静注过多低渗溶液或各种原因引起的水钠潴留)。 (2) TP增高：见于蛋白合成增加(多发性骨髓瘤,异常球蛋白增加)、血浆浓缩(急性脱水，外伤失血等)。 (一) TP测定 2.双缩脲法测定TP 注意事项 (1)黄疸、严重溶血等有明显干扰,可用标本空白管消除。如果 标本空白管吸光度太高，可影响结果准确度,使测定结果偏高。 (2).脂血混浊血清会干扰比色,使测定结果偏高,可用乙醚抽提。 (3).显色温度控制在37±1℃,使用经校正的高级分光光度计(波 长带宽≤2nm),比色杯光径1Cm比色。 (4).血清蛋白质的含量一般用g/L表示,因为各种蛋白质的分子 量不同,不能用mol/L表示。 (5).生化自动分析仪测定时，黄疸、溶血、脂血等不合格标本 一搬不进行测定。 (一)TP测定 2.双缩脲法测定TP 方法特点 (1).双缩脲显色反应仅和蛋白质中肽键数成正比,与蛋白质种类,分子量及 氨基酸组成无明显关系,各种蛋白质显色程度基本相同,显色稳定性好,试剂 单一。 (2).双缩脲法重复性好,RCV4%,CCV3.9%;线性范围0-140g/L,干扰少,使用 单一的稳定试剂,操作简单、快速,适于手工操作及自动化分析,为TP测定的 参考方法。 (3).唯一的缺点是灵敏度较低，比酚试剂法低约100倍,但能满足临床生化 检验需要,对血清总蛋白定量较为适用;对蛋白质含量很低的其他体液如脑 脊