2013.4.15疟原虫血片制作染色.ppt

血片制作所需设备 载玻片 具有磨砂面，且规格是玻片宽度乘长度在25.2*75.2mm，厚度1mm~1.2mm为好。 推玻片 有专用的。但现在一般选择边缘光滑整齐的载玻片替代推玻片。 采血针 使用一次性的采血针。 玻片盒 木制/塑料均可以。 75%酒精棉球 用于采血部位的消毒。 记号笔/B2铅笔 用于载玻片上编写号码。 Whatman(沃特曼)903号；将滤纸切成10*2cm大小的纸片，以口径为1.2cm的大孔管，在滤纸上压出两个圆形印迹备用。 血片的染色（一）染液的种类及染色原理 染液种类：目前所用的血片染色液，虽然名称很多，但都是从罗门诺夫斯基氏创造的染液变化过来的。总的可分为水溶液和酒精溶液两大类，前者包括罗氏、西氏（Simon)、J.S.B氏染液等，后者包括利氏(Leishman)、瑞氏和吉氏染液（被国家推荐使用）等。这些染液中的主要染剂都包含美兰、伊红和由美兰氧化所成的天青，所以称为多色性染剂。 注：用于薄血膜的染色和一般漂洗时，用蒸馏水稀释至1 000ml，用于厚血膜及同一张玻片上厚血膜与薄血膜的染色时，用蒸馏水稀释至500ml。 * * 谢谢 * * * 疟原虫血片制作及染色技术 湖北省疾病预防控制中心 * * 载玻片的清洗 载玻片 用以涂制血膜的载玻片，必须清洁无油迹。有油迹的载玻片涂制的厚血膜容易脱落，薄血膜涂不均匀。 新玻片处理 应浸于有液态洗涤剂清水中10~20分钟，然后用干净棉巾逐个擦拭，再用清水冲洗干净，晾干后用干净柔软的棉巾擦亮备用。也可以95%的乙醇浸泡5~10分钟，再用纱布擦干擦亮备用。 旧玻片处理 用过的玻片浸泡洗涤剂溶液中1~2天或者浸泡于煮沸好的5%肥皂水中1~2小时，逐个擦去玻片上的旧血膜痕迹，用清水漂洗干净擦干擦亮。 洗净载玻片处理 每10~20张用白纸包好或者装原玻片盒里再放入塑料袋内，保存于干燥环境中备用。 * * 取血部位及方法 取血部位及方法 取血部位以耳垂较为合适，也可在手指末端采血，婴儿可从拇趾或足跟取血。先用75%酒精棉球消毒取血部位后，以一次性采血针迅速刺入取血部位1~2毫米深，然后用左手大拇指、食指和右手中指协同挤出血滴。 * * 采血时间 取血时机 现症病人一般可随时取血，疟疾普查时可不考虑取血时机。但在诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。 间日疟在寒热发作时，外周血液中主要可见环状体期；发作后数小时，环状体发育到滋养体期，疟色素形成，形态较易辩认，为诊断疟疾的有利时机；36~48小时，可检出裂殖体；发作一、二次后，配子体出现较多。 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20小时内取血，初发患者退热后常查不到疟原虫。 涂制血膜规则 用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂成圆盘状，称厚血膜。薄血膜上的血细胞要求平辅在玻片上面。 涂片顺序，先厚后薄；位置分配，血片自左向右：薄-厚-标签；推薄片用玻片短边。 制作厚血膜 制作薄血膜 * * 厚血膜血量及涂片法 厚血膜 用推片的一角，从取血部位刮取约4~5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋转，转2~4圈，涂成直径0.8~1厘米大小圆形厚血膜，血膜厚薄均匀，过厚易于脱落，过薄达不到检出率的要求。 * * 薄血膜血量及涂片法 薄血膜 取洁净的载玻片2张，1张平置在桌上，以左手拇指，食指夹持载玻片两端（手指切勿接触玻片表面），用另一张边缘平滑（最好为磨口边缘）的载玻片做推片，用推片一端边缘的中点从取血部分刮取约1~1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血滴与平置的载玻片接触，并形成25~35度夹角，待血液向两侧扩展约2厘米宽度时，均匀而迅速地轻轻向左推出（约2.5厘米长）且边缘带有“舌状”的薄血膜。 * * 涂制厚、薄血膜的位置 通常是将厚、薄血膜涂在一张载玻片上。方法是将载玻片分为3等分（留出标签或磨砂面位置后的3等分）。厚血膜涂在载玻片靠近标签或磨砂面方向的右1/3中央处，圆形、厚薄均匀、边缘整齐。薄血膜涂在载玻片1/2至左1/3的中部位置，舌状、厚薄均匀。 * * 血片编号 血膜制成后，立即将受检者的个人编号写在玻片磨砂面上（血片的编号要与血检登记本上编号一致）以防差错。 * * 制作血膜的注意事项 1. 玻片清洗时，避免玻片碰撞、磨损。制作血膜的载玻片必须完全清洁而毫无油渍或污垢。制片时，手指只能持载片的边缘，不能接触玻片表面，以免油污使薄血膜产生空白区以及厚血膜脱落。作为推片的玻片边缘一定要平滑，才能使推出的血膜均匀一致。 * * 制作血膜的注意事项 2. 刚涂制的血膜要平放在标本盒内或者实验台面上。厚血膜未干前勿使标本片倾斜