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B3
酵素操作方法
1 基本分析方法
2 澱粉磷解純化方法
3 電泳檢定法
4 蛋白質電泳轉印及相關應用
B3 操作方法
B3 酵素操作方法的內容,大部分取自陳翰民博士論文(1997) 中的方法
一章,並加修改以便適合本課程之用。同學可以參考操作方法內的各
種實驗技術,但若有必要也可以更動之。
190 ECX 2005
B3 操作方法
酵素操作方法
1 基本分析方法 193
1.1 蛋白質定量法 193
1.1.1 Bradford 定量法 193
1.1.2 BCA 定量法 194
1.2 澱粉磷解活性分析 195
1.3 澱粉磷解動力學分析 196
2 澱粉磷解純化方法 199
2.1 粗抽取及硫酸銨分劃 199
□ 表2.1 各百分飽和濃度硫酸銨添加量 200
2.2 膠體過濾法 200
2.3 離子交換法 202
2.4 製備式電泳與電泳溶離 203
3 電泳檢定法 205
3.1 不連續膠體電泳 (native) 205
□ 表3.1 常用native膠體溶液 206
3.2 SDS 膠體電泳 207
□ 表3.2 常用SDS膠體溶液 208
3.3 梯度膠體電泳 209
3.4 等電焦集法 210
3.5 膠體染色法 212
3.5.1 Coomassie Brilliant Blue R (CBR) 染色法 212
3.5.2 硝酸銀染色法 212
3.5.3 醣蛋白質染色法 (過碘酸-硝酸銀法) 214
3.5.4 澱粉磷解活性染色法 215
3.6 膠片乾燥法 216
4 蛋白質電泳轉印及相關應用 217
4.1 蛋白質電泳轉印法 217
4.2 酵素免疫染色 218
4.3 蛋白質N-端序列決定法 220
ECX 2005 191
B3 操作方法
192 ECX 2005
B3 酵素操作方法
1 基本分析方法:
酵素化學實驗中,兩種最基本的分析方法,就是蛋白質定量,以及該酵素的專一性催化
反應。本實驗課程從頭到尾都要用到這兩種分析方法,請自琢磨出精準的定量技術。
1.1 蛋白質定量法:
以 96 孔的微量滴定盤,進行蛋白質的定量;有以下兩種常用的方法。
1.1.1 Bradford 定量法:
Bra
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