小鼠骨髓染色体制备与观察资料.pptVIP

利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法 . 猫叫综合征，患者第5号染色体短臂缺失，故又名5p—综合征，为最常见的缺失综合征，因婴儿时有猫叫样啼哭而得名，其原因在于患儿的喉部发育不良或未分化所致，发病率约为1/50000，女患者多于男患者。 亦称爱德华氏综合征。18三体综合征的畸形主要包括中胚层及其衍化物的异常（如骨骼、泌尿生殖系统、心脏最明显）。此外，接近中胚层的外胚层（如皮肤皱褶、皮嵴及毛发等）及内胚层（如美克尔憩室、肺及肾）也异常。文献报道胚胎5周前发育正常，在妊娠第6～8周开始出现异常。 * 利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法 将制好的玻片置于显微镜下，首先观察标本的制备效果，检验操作过程是否正确。一般来说，制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。此时间期细胞由于低渗和固定处理，细胞膜和质已被去掉，镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细胞膜包裹，染色体之间无重叠，易分辨，臂的长度适中。但最重要的是分裂相要多。分裂相的多少主要取决于秋水仙素的用量和时间。秋水仙素还影响染色体的形态，如用量过大，常使染色体过于缩短，不利于观察。 小白鼠的染色体数目（2n）为40条，但全部为端着丝粒染色体，大小区别不明显，较难分组编号，一般为“U”、“V”形 实验三、小鼠骨髓染色体标本的制备及观察 赵兴华 医用生物学教研室 一、实验目的 初步掌握（小鼠）骨髓细胞染色体标本的制备原理和方法 巩固显微镜的操作技术 了解小鼠的染色体形态特征 二、实验原理 染色体是组成细胞核的基本物质，是基因的载体。染色体异常也称染色体发育不全。目前已确认染色体病综合征100余种，智力低下和生长发育迟滞是染色体病的共同特征。 21三体综合征； 18三体综合征、 猫叫综合征 18三体综合征 二、实验原理 染色体标本的观察广泛应用于一些疾病的临床诊断中。例如白血病、恶性血液病等的诊断。 染色体是染色质在细胞分裂期的存在形式。 细胞分裂的中期，染色体在赤道板上排列清晰，是染色体观察的最佳时期。 骨髓细胞 数量多且分裂旺盛，可直接进行染色体标本的制备。取材方便，操作简单和无需体外培养和无菌操作，是研究小型哺乳动物等染色体的常用方法。 人骨髓染色体抽取 怎样才能制备一个好的染色体标本？ 获得大量处于有丝分裂中期的细胞。 使细胞膜破裂，且染色体能够完整并较分散的释放出来。 秋水仙素处理：秋水仙素溶液可抑制纺锤体的形成，使正在分裂的骨髓细胞停止在细胞分裂中期，积累大量中期分裂相细胞。 低渗作用: 使细胞充分膨胀，减少染色体间的相互缠绕和重叠。 预固定：终止低渗作用，使细胞离心时不易破裂，固定维持细胞形态结构。 高距离滴片：使细胞膜易于破裂，获得中期染色体标本，在显微镜下观察染色体的结构和数量。 三、实验器材和试剂 1、器材 蜡盘、手术剪、小镊子、平皿、注射器、10ml离心管、吸管、量筒、预冷载玻片、试管架、离心机、恒温水浴锅、显微镜、香波油、乙醚酒精、擦镜纸 2、试剂 100ug秋水仙素液、 0.075 mol/L KCl 低渗液、 Giemsa染液，固定液（甲醇：乙酸=3:1） 1.秋水仙素处理：选择体重20g左右的小白鼠，按2~4ug/g(小鼠)秋水仙素，于处死前4h，对其进行腹腔注射100ug/mL秋水仙素液。 四、实验步骤 注意：剪去少量骨质，避免骨髓细胞丢失；擦净血迹和肌肉细胞以免影响观察；用0.075 mol/L KCl 收集足量细胞，反复冲洗直到股骨发白。 2.取材：颈椎脱臼法处死 取两后肢股骨 纱布擦净肌肉 剪去股骨两头，暴露骨髓腔 低渗液(5ml)冲洗至离心管内 收集骨髓细胞 颈椎脱臼法处死小鼠 3. 低渗：用吸管吹打骨髓细胞使其分散，加入预温37℃的低渗液至8ml,将离心管至37℃水浴锅中，保温至少30 min后取出，使细胞充分吸水膨胀。 低渗不足，则细胞膨胀不够，滴片时细胞不易破 裂，染色体也不易分散开。 低渗过度，则细胞提前破裂，染色体观察不全。 空气吹打法：用吸管橡胶头内的空气混匀液体。 4. 预固定：加1ml新配制固定液 混匀 1500r/min，5min 弃上清液。 固定液（甲醇：冰乙酸=3:1）需现配；离心需要配平。 作用：终止低渗；维持细胞的膨胀状态；防止离心破裂