实验1.特殊显微镜的使用.ppt

当一束光线透过黑暗的房间，从垂直于入射光的方向可以观察到空气里出现的一条光亮的灰尘“通路”，这种现象即丁达尔效应。 * 细胞生物学实验 史晋绒 2016-03 生命科学学院 遵守实验纪律，按时到达实验室，避免迟到或早退。实验中途因故需外出时，向老师请假。 保持实验室安静，禁止大声喧哗、打闹。 严肃认真地进行实验，如实做好各项观察与记录。 实验过程中要爱护仪器设备，如遇仪器损坏等现象，及时上报。 实验材料、药品及水、电等要节约，取用时不可过量。取用试剂后，要及时盖上瓶盖，取出的药品或溶液不得倒回瓶内。滴管等不可混用。 实验中注意安全。使用有毒试剂要严格按照操作规程。易燃物品远离火源。严禁湿手接触电源。 保持实验室内清洁整齐。实验结束后，各组清理自己的实验台，将器材清洗后清点数目，摆放整齐。实验室卫生由课代表安排各组轮流，经老师检查允许后方可离开。 实验室规则 在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，要求真实、准确，注意各部结构的比例关系。 用铅笔绘图，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表示，不得涂阴影或进行其它美术加工。 各部分结构名称要在一侧引直线注明，各引线要平行不得交叉，在图的下方要注明图名，放大倍数。 每幅图的大小、位置在纸面上须安排得当并注意纸面的整洁。 细胞生物学实验绘图方法与要求 实验一 特殊显微镜的使用 生命科学学院 细胞生物学实验 右手握住镜臂，左手托住底座 正确取镜姿势 普通光学显微镜 家蚕中肠细胞（40×） 常见特殊显微镜 解剖镜 倒置显微镜 荧光显微镜 扫描电镜 透射电镜 蓝曼龙的胚胎发育过程 倒置相差显微镜 TEM OM SEM 1m=103mm=106μm=109nm 分辨极限0.2 μm 放大倍数10×40倍 分辨极限0.2 nm 放大倍数 数万倍 1mm 100μm 1cm 10μm 1μm 100nm 10nm 1nm 0.1nm 肉眼分辨0.2mm 电子显微镜 扫描隧道显微镜 光学显微镜 扫描隧道显微镜 用STM拍下的血细胞 用STM拍下的DNA 一、暗视野显微镜的使用 二、荧光相差显微镜的使用 了解暗视野显微镜、相差显微镜和荧光显微镜的工作原理和使用方法。 实验目的： 实验内容： 根据丁达尔效应原理设计的一种在黑色背景条件下观察被检物体的显微镜 观察到明场看不到的极其微小的物体 最高分辨率可达0.004微米 人血细胞（40 × ） 人血细胞（40 × ） 1.1 原理 丁达尔现象 微粒发光原理 1.2 结构特点 使用中央遮光板或暗视野聚光器光源的中央光束被阻挡光线倾斜照射在观察的标本上，标本遇光发生反射或散射，散射的光线投入物镜内整个视野是黑暗的。 1.3 优缺点 可分辨0.004um以上的微粒的存在和运动 可用以观察活细胞的结构和细胞内微粒的运动 只能看到物体的存在和运动，不能辨清物体的细微结构 1.4 应用 微小粒子、细菌形态、细菌记数，透明标本观察等。 1.5 暗场显微镜的要求 要求载玻片和盖玻片必须无疵痕和灰尘 物镜前透镜必须清洁无尘 载玻片和盖玻片厚度必须绝对符合要求 人的眼睛只能感觉光波的波长（颜色）和振幅（亮度）的变化。因此难以看到无色透明的活细胞。 相差显微镜：把透过标本不同部分的可见光（通过环形光阑形成的环状入射光）的光程差转变成振幅差（光强度），从而提高各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。 用途：主要用于观察活细胞或不染色的组织切片，有时也可用于观察缺少反差的染色样品。 2.1 原理及用途 相差显微镜光路图 荧光显微镜：利用一个高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光(如紫外光365nm或紫蓝光420nm)作为激发光，激发标本内的荧光物质发射出各种不同颜色的荧光后，再通过物镜和目镜的放大进行观察。这样在强烈的对衬背景下，即使荧光很微弱也易辨认，敏感性高。 用途：主要用于细胞结构和功能以及化学成分等的研究。 荧光显微镜光路原理 什么是荧光？ 物质中的电子吸收光的能量由低能状态转变为高能状态，再回到低能状态时释放出的光，是非温度辐射光——冷光。即：物质吸收短波光，发射出长波光。 荧光的种类： 自发荧光（固有荧光）：生物体中有些化学成分在短波谱线照射下可自发地发出荧光。例如某些种类的维生素(VB6)、生物色素（叶绿素）、弹力纤维等，但显色效应和显像效应很微弱。 二次荧光（次生荧光）：生物标本用荧光色素处理之后，在短波谱线照射下可以激发出荧光，显色效应和显像效应极为强烈。 荧光光源 一般采用超高压汞