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第八章 核 酶  从人类认识到酶的存在开始到20世纪80年 代初，人们一直认为酶的化学本质是蛋白质， 这一概念根深蒂固，近似乎成为定论。 然而美国科罗拉多大学博尔分校的Thomas Cech和耶鲁大学的Sidney Altman各自独立发现 具有生物催化功能的RNA却从根本上改变了人 们的这一认识观念。  1981年Cech等发现四膜虫的核 糖体前体RNA可以在没有蛋白 质存在的情况下自身催化切除 内含子，完成加工过程。 具体事件: 1981年Thomas Cech等在研究rRNA 前体加工成熟时就发现四膜虫的26rRNA 前体中含有插入序列（IVS），在rRNA 前体成熟过程中，IVS通过剪接反应被除 去，并证实这一剪接反应不需要任何蛋白 质的参与，是四膜虫的基因内区自行拼接 的。  1981年,耶鲁大学的Sidney Altman等 在从事RNaseP的研究中也发现了这一现 象，RNaseP是细菌和高等生物细胞里都 有的一种tRNA加工酶，它能在特定的位 点上切开tRNA前体。  1983年，就在Thomas Cech等发现 RNA能自行拼接后的两年后，Sidney Altman等就证明：在较高的Mg2+浓度下， RNaseP中的RNA（M1RNA）就单独具有 催化tRNA前体成熟的功能，而其蛋白质 组分却不具备此种催化功能。 根据当时催化剂不仅能加快反应 速率，而且在反应前后催化剂本身不 发生改变的准确定义，在Thomas Cech等发现四膜虫26SrRNA前体IVS 的自身拼接后，科学家们还排斥它作 为生物催化剂的资格，认为那是一种 自体催化反应，拼接后的成熟rRNA 与前体不同，尚不能被看成是严格意 义上的催化剂。  Sidney Altman等的发现就从实验 上消除了这一异议，原因是RNaseP所 催化的反应是一种异体分子间的反应， 而该反应正是在RNA的催化下完成的。  此后， 1984年R. Lewin在Science发 表的题为“First True RNA Catalyst Found”的报道标志着RNA催化剂的正式 诞生。  R. Lewin, First True RNA Catalyst Found , Science, 1984, 20:266-267  Thomas Cech等把这类具有催化裂 解活性的RNA分子取名为Ribozyme， 在我国1994年科学出版社出版的《英 汉分子生物学与生物工程词汇》将 Ribozyme译为核酶，这是最普遍的译 法，也可被叫做核糖拟酶。  结果: 这些具有催化活性的RNA的发现 改变了传统上“酶是蛋白质” 的观念， 从此对具有催化活性的RNA，即核酶 (ribozyme)的结构、催化机制以及应 用的研究日益深入。  核酸分子在总体的催化潜力 上和蛋白质相差甚远，但由于 可以遗传和变异而被自然界保 留下来催化一些特殊的反应。  核酶由于具有许多优点而受 到重视，例如用于治疗的核酶注 射入体内不会产生免疫原性，对 具有切割活力的核酶可以更加自 由的设计其切割RNA的位点。  分子进化工程的诞生，使核 酶的研究迅速发展，人工进化出 自然界中不存在的多种功能的核 酶（包括单链DNA酶），这些研 究成果在理论和实际应用中都有 着巨大的意义。 核酶 酶的化学本质是蛋白质 传统观念 只有蛋白质才能有催化功能 上世纪80年代初 核酶 Cech和Altman各自 独立地发现 RNA 生物催化功能 酶蛋白质 只有蛋白质才能有催化功能 ？ 核酶的作用底物 RNA DNA 核酶 多糖 进一步的研究发现， 氨基酸酯 这是一种多功能的生 物催化剂可以作用于  核酶按其大小不同，大致可以分为两类， ①大分子核酶，如RNaseP、I组内含子和II组 内含子；其分子大小为几百到几千个核苷 酸； ②小分子核酶，如锤头型核酶、发卡型核酶、 丁型肝炎病毒核酶等，其大小一般为35~155 个核苷酸。 根据核酶的催化反应不同，可以将核酶分成两 大类: ①剪切型核酶，这类核酶催化的是自身或者异 体RNA的切割，相当于核酸内切酶，主要包 括锤头型核酶、发夹型核酶、丁型肝炎病毒 (HDV)核酶以及有蛋白质参与协助完成催化 的RNaseP； ②剪接型核酶，这类核酶主要包括I组内含子和 II组内含子，实现mRNA前体自我拼接，具 有核酸内切酶和连接酶两种活性。  1. 核酶的催化类型 已经发现了几十种核酶，按反应类别 可分为催化分子内反应和催化分子间反应 等两大类，而催化分子内反应的核酶又可 分为自我剪接型核酶和自我剪切型核酶。 1.1 I型内含子的自我剪接 Cech等在研究工作中发现，转录产物 (RNA前体)很不稳定，在没有任何蛋白质 或酶存在的情况下，可自动切除423