第二章有效成分分析—经典方法2.pptVIP

第二章 有效成分分析—经典方法 ;第二章 有效成分分析—经典方法;第一节 薄层色谱法;一、薄层色谱概述 1938年，俄国人，氧化铝薄层，天然药物； 1965年，德国化学家，《薄层色谱法》，推动了此技术的发展； 70年代中后期，高效薄层色谱（HPTCL）； 80年代以后，薄层色谱光密度扫描仪，各步操作实现仪器化、计算机化。 分离与纯化：农药原药或制剂（混合物），与其他方法结合使用。 定性和半定量：设备简单，分析速度快，分离效率高，结果直观；其分离容量及效果不如柱色谱。;普通薄层色谱基本整套工具配置 ;薄层色谱（自动）仪器;分离各种染料的薄层色谱图;二、吸附薄层色谱法原理;三、薄层色谱操作技术;（1）薄层材料 a.玻璃板 b.吸附剂：硅胶、氧化铝 硅胶，弱酸性，分离酸性和中性物质； 氧化铝，弱碱性，分离碱性和中性物质。 可用稀碱水或稀酸水改变原来的酸碱性。 ;c.黏结剂 无机黏结剂 石膏（硫酸钙, 13%）， “G”、“H”。 优点：耐高温，耐酸碱，但易凝固。薄层强度差，易碎。 有机黏结剂 羧甲基纤维素钠（CMC，0.5%~1%）、淀粉（5%）、煅石膏（10%~20%）等。 其特点是薄层强度高、使用方便，但不能用浓硫酸等腐蚀性物质做显色剂。; d.荧光指示剂 以“F”表示。 例：硅胶HF254 、GF254 ; （2）薄层板的制备; 2、薄层板活化 涂布后的薄层先在室温下阴干，在使用前置适当温度烘烤一定时间进行活化，然后置干燥器中备用。 硅胶 110℃ 1 h 氧化铝 110℃ 30min;3、点样; （2）点样方式 a. 手工点样; b. 自动点样 端口平齐、垂直，避免划伤薄层固定相 药典规定：基线距底边2.0cm, 两端各留1~1.5cm，样点d=2~4mm, 点间距为1.5~2.0cm。; （3）点样量 与薄层的厚薄、性能、显色剂的灵敏度有关。 具体由预试确定，一般： 圆点：几 ~ 几十 ug, 尽量小 带状：可达mg，细直;4、展开 流动相沿薄层板从原点移向前沿的过程。 展开距离一般为10~15cm。 上行展开、多次展开、二维展开 （1）上行展开;（2）多次展开 用不同极性溶剂展开 （3）二维展开 在两个垂直的方向上进行展开。;5、显色（定位） 对待测成分的确认和检出 （1）紫外光下显色 1）直接显色 2）荧光淬灭：GF254 （2）碘 与化合物发生物理吸附作用，呈现淡黄棕色。; （3）氯化钯 含硫农药 0.1g氯化钯，溶解于5ml 0.1ml/L硫酸中，加水100ml 放置后，直接喷洒于薄层板上即可。谱带呈黄棕色。;6、定性;影响Rf值的因素： 吸附剂的性质和质量、吸附剂的活性、展开槽的饱和程度、边缘效应。 边缘效应：同一样品，点在薄层板中部和边缘处时，Rf值不同，特别是用低沸点混合展开剂（如氯仿、甲醇混合物等）时更明显的现象。;7、溶出（洗脱） 将农药有效成分的条带刮下来，选合适的有机溶剂将其有效成分从硅胶上洗脱下来，选用合适的方法进行定量分析。 薄层—定胺法、薄层—溴化法、薄层—银量法等;三、流动相与展开体系; ;四、薄层色谱法在农药分析中的应用;; 薄层扫描法检测益母草中 农药百治磷的限量; 薄层扫描法测定助杀灵中苦参碱含量;第二节 重量分析法;第三节 滴定分析法;第四节 紫外-可见分光光度法; 二、定量方法 外标法： 先在选定的测定条件下，分别测定一系列已知浓度的标准溶液，用得到的吸光??值与相应的物质浓度作图，得到标准曲线，然后进行样品测定，在曲线上找出与样品吸光度值相应的物质含量，计算农药有效成分含量。 ;例：;三、影响定量的因素 吸光度与浓度之间线性关系的偏离（正、负） 1、样品浓度过大； 2、试样含有悬浮物； 3、化学作用； 4、选择的仪器读数范围不当。 A = 0.2~0.7 ;四、紫外可见光谱法在农 药检验方面的应用;一些常用农药的最大波长; 如敌克松原药为黄棕色，435nm处有最大吸收。;（1）经化学反应生成有色物： 对硫磷 对硝基酚，黄色 五氯酚 四氯代苯醌，黄色 （2）引入显色基团生成有色化合物： 农药 酚类或芳胺 + 偶氮试剂