生物化学4抗体制药.ppt

* 2 * 3（4.18） * 4（4.19） * 3(4.25) * 4（4.26） * 3(5.2) * scFv抗体库展示载体pHEN2 周质腔表达 琥珀型终止密码子TAG 琥珀突变 （supE，编码琥珀突变 型tRNA)抑制菌株 谷氨酸 噬菌体抗体库的筛选：9天可完成3次筛选 对目的克隆进行表达和检测 噬菌体抗体库技术的特点： 能包含B细胞全部克隆，库容量大，可筛选到各种抗体 避开了人工免疫和杂交瘤技术，直接获得抗体基因 可获得高亲和力的人源化抗体 筛选得到的抗体更易于在大肠杆菌中表达 噬菌体抗体库为抗体工程发展的一个里程碑。 成功筛选出大量抗体，有些已经进入临床实验阶段 噬菌体抗体库还可用于抗体分子定向进化的筛选 新型抗体库技术： 选择性感染噬菌体展示抗体库技术 核糖体展示抗体库技术 4.6 抗体诊断试剂 抗体诊断药物基本分为三类： 血清学鉴定用的抗体试剂 免疫标记技术用的抗体试剂 体内导向诊断药物 一、血清学鉴定用的抗体试剂 血清学鉴定： 用已知抗体来鉴定未知的抗原型，主要用于疾病的病原菌诊断和血型鉴定。 基本原理： 抗体与抗原之间的凝集反应 （1）鉴定病原菌用的抗体试剂 诊断血清 162种 （2）乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的反向被动血凝诊断试剂 灵敏度与酶免疫测定法相同，操作简便快速。 （3）妊娠诊断试剂 检测血液和尿液中的绒毛膜促性腺激素HCG。 （4）抗ABO血型系统血清 红细胞表面存在A或B凝集原，鉴定血型 二、免疫标记技术用的抗体类试剂 荧光抗体诊断试剂 　 酶免疫测定用抗体诊断试剂 放射免疫用抗体诊断试剂 （1）荧光抗体诊断试剂 　 荧光抗体: 荧光色素, 如异硫氰酸荧光素（FITC）、罗丹明（RB200）、藻红素（PE）等标记抗体蛋白而成。 主要用于组织内或细胞内抗原物质的定位测定： 用荧光抗体浸染含有抗原物质的组织切片或细胞，荧光抗体与抗原结合，在荧光显微镜下成为发光的可视物，达到诊断和定位目的。 直接法: 荧光抗体直接与抗原反应，抗原鉴定、定位和分布。 需要制备所需检测抗原的相应抗体。 荧光CD单克隆抗体： 白细胞分化抗原（表面标志）： CD（分化群，cluster of differentiation），按发现先后编号（1~247） 相应的CD抗原的荧光标记单克隆抗体用于细胞的鉴定、分离。 间接法 标记抗免疫球蛋白抗体（二抗、抗抗体） 标记一种抗体，可检测多种抗原抗体系统，灵敏度比直接法高5~10倍。 根据一抗不同，二抗 种类不同：羊抗兔抗体、羊抗人抗体等。 （2）酶免疫测定用抗体诊断试剂 　 用酶标记抗体来检测抗原或抗体，酶的显色反应。 常用酶：辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶(AP)等。 标记抗体：一抗或二抗 分类：免疫酶染色（组化法）和酶免疫测定 　 免疫酶染色（组化法） 用于组织内抗原物质的定位测定。 酶标（辣根过氧化物酶，HRP ）抗体与抗原发生特异性结合， HRP催化底物二氨基联苯胺（DAB）生成棕褐色沉淀物,标本的抗原部位显色，光学显微镜下观察。 酶免疫测定（定量测定溶液中抗原或抗体浓度） 抗原抗体结合后，分离结合物，利用所标记酶将底物转化为有色产物，使用分光光度进行测定。 ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay, 酶联免疫吸附试验）： 抗原或抗体吸附于聚苯乙烯塑料表面，抗原抗体在塑料表面进行, 非结合抗原或抗体容易洗去，简化抗原抗体结合物的分离。 ELIS