G418筛选tzmbl细胞适宜浓度实验.docVIP

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2017-06-27 发布于江西
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G418筛选tzmbl细胞适宜浓度实验

建立MicoRNA稳转TZMbl细胞系所用G418筛选浓度实验实验目的实验细胞 G418 G418储液浓度建立MicoRNA稳转TZMbl细胞系所需要的G418筛选浓度 TZM-bl细胞实验室自制 2006 500mg/mL 将TZM-bl细胞以1000个/孔的密度接种到96孔板中。 1. 24 h后，弃去旧的培养基，分别用含有200 μg/mL、400 μg/mL、800 μg/mL、16 000 μg/mL、 3200 μg/mL G418的DMEM培养细胞。 G418储液浓度为500mg/mL=500μg/μL，先用DMEM培养基将其稀释为50μg/μL的工作液。每个剂量组做三个复孔，每孔加入100μL含有G418的DMEM培养基，每次准备的各个剂量DMEM培养基按500μL计算，一次性配制10次的培养基量，为5000μL。对照组，加入100 DMEM培养基表1含有不同剂量组G418的DMEM培养基配制 0 1 2 3 4 5 G418体积（μL） 100 （从前一管中吸取，后面类推）640 5000 5000 5000 5000 DMEM体积（μL） 900 9360 5000 5000 5000 5000 管中G418浓度（μg/mL） 50000 3200 1600 800 400 200 每孔G418含量（μg） 320 160 80 40 20 每孔加入体积（μL） 100 100 100 100 100 G418工作液浓度（μg/mL） 3200 1600 800 400 200 （0号管为1.5 ml EP管，2-5号为15 ml无菌离心管） 2 3 4 5 6 7 B 3200μg/mL 1600μg/mL 800μg/mL 400μg/mL 200μg/mL 对照 C D 表2不同剂量组G418的DMEM培养基加入96孔板三、2~3天更换新鲜培养基，培养2周，选择细胞全部死亡的最低G418浓度作为细胞筛选的浓度。最终确定筛选用G418浓度为---------μg/mL。