高效液相色谱仪的应用.pptVIP

现代分析仪器应用技术 — 高效液相色谱仪 主讲：李春萍 西北农林科技大学生命科学学院 lcccp2006@126.com029 内容 色谱法基本知识 高效液相色谱相关内容 影响分离的因素 实验前准备工作 主要分析步骤 一、色谱分析法 起源 基本概念 分类 起源:1906年俄国植物学家米哈伊尔·茨维特 色谱分离法 又称层析法，层离法等，是一种现代的物理化学分离、分析方法，广泛应用于化学、医药、生化、环保等领域，它既可用于混合物的分离和样品纯度的检查，又可用于对化合物的定性和定量分析。 基本概念 基线：色谱柱中只有流动相通过时，检测器响应信号的记录值。它反映检测器本底的高低。 噪声：由未知的偶然因素引起的基线起伏现象。 峰宽：通过色谱峰两侧的拐点切线，在基线上所截的距离。 保留时间：从进样点到色谱峰的顶峰的时间。 死时间：流动相通过色谱系统的时间。在HPLC中为溶剂峰前沿出现的时间。 死体积：进样器到检测器出口未被固定相所占有的空间。 色谱峰：流出曲线上的突起部分。 分配系数（K）：分配平衡后，组分在固定相与流动相中的浓度之比。K与组分、固定相、流动相及温度有关。 容量因子（k）：也叫分配容量、容量比及质量分配系数等，是达到分配平衡后，组分在固定相的量与流动相中的量之比。 基本概念 基线漂移： 是基线的一种向上或向下的缓慢移动，可在较长时间（0.5-1.0h）内观测到。可掩蔽噪声和小峰，它与整个液相色谱系统有关。 线性范围：当注入最小至最大进样量时，检测器响应处于与进样量成正比的范围。 检测器的池体积：它应小于最早流出的死时间色谱峰的洗脱体积的1/10，否则会产生严重的柱外谱带扩展。 灵敏度：也叫响应值，指一定量的物质通过检测器时所给出的信号大小。灵敏度越高，检测限越小。它是没有考虑噪声，其高低变化并不能严格表示检测器的检测能力。 检测限：又称为敏感度，指在噪声背景上恰能产生可辨别的信号时（一般信噪比≥2）， 在单位体积或单位时间内需向检测器送入的样品量。它考虑了噪声，是全面衡量检测器性能的重要指标。检测限越小，仪器性能越好。 色谱法分类 按分离的机理可分为： 吸附色谱：是利用吸附剂表面对不同组分吸附性能的差别而使混合物得以分离。 分配色谱：是利用不同组分在固定相与流动相间的分配系数（或溶解度）不同而使混合物得以分离。 离子交换色谱：是利用不同组分对离子交换剂亲和力不同而使混合物得以分离。 凝胶色谱(排阻色谱)：是利用凝胶对不同组分因分子大小不同而阻滞作用不同使混合物得以分离。 亲和色谱、毛细管电泳和毛细管电色谱。 色谱法分类 按操作形式可分为： 薄层色谱：吸附、分配、离子交换、凝胶薄层。 纸色谱：分配色谱。 柱色谱：吸附、分配、离子交换、凝胶柱色谱。 按流动相状态的不同，可分为： 气相色谱法 (GC) 液相色谱法 (LC) 超临界流体色谱 (SFC) 二、高效液相色谱相关内容 特点 研究对象 高效液相色谱仪展示 高效液相色谱仪工作流程 高效液相色谱仪结构 高效液相色谱法分类 1 HPLC特点 高效液相色谱法是20世纪60年代后期发展起来的一种新颖、快速的分离分析技术。 高 压：压力可达（1.52-3.04) ×104 kPa。 高 速：所需的分析时间一般少于1h。 高 效：一根柱子可以分离100 种以上的组分。 高灵敏度：用微升数量级的试样可进行分析。 流动相选择范围广：大部分的有机溶剂以及水 和有机溶剂的混合物均可用。 2 研究对象 高沸点化合物； 难挥发及热不稳定的化合物； 离子型化合物及高聚物等。 3 高效液相色谱仪展示 3 高效液相色谱仪展示 3 高效液相色谱仪展示 3 高效液相色谱仪展示 3 高效液相色谱仪展示 4 高效液相色谱仪工作流程 贮液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数。在两相中作相对运动时，经过反复多次的吸附--解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出。通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。 5 高效液相色谱仪的结构 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 色谱数据处理系统 高压输液系统 包括： 流动相贮存器 高压输液泵（核心部件）: 能提供150-450kg/cm2的压强；流速稳定，流量可以调节；应符合：密封性好、输出流量恒定、压力平稳、可调范围宽、便于迅速更换溶剂及耐腐蚀等要求。 过滤器 梯度洗脱装置 : 可将两种或两种以上的不同极性溶剂，按一定程序连续改变组成，以提高分