酶的提取 - 湖南大学.pptVIP

第六章 微生物学新技术在环境工程 中的应用 第一节 固定化酶和固定化微生物在环境工程中的应用 酶是由细胞产生的能够催化生物化学反应的活性物质。酶在微生物细胞内能够发挥作用，将它提取出在体外也能发挥作用。酶制剂广泛应用于食品加工、发酵工业、印染退浆、生丝脱胶、制革、化妆品、污废水生物处理、废气生物净化等。 一 酶制剂剂型 （一）干燥粗酶制剂 将培养液除菌（或不除菌）后与淀粉等惰性填料混合、烦躁制成粗酶。 （二）稀液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体杂质后直接加入稳定剂和防腐剂。 （三）浓液体酶制剂 将培养液过滤除去菌体杂质后浓缩，加入稳定剂和防腐剂。 （四）结晶酶 将酶浓缩、去杂质、纯化后在适当的温度、pH下加入铵盐或有机溶剂使其析出结晶。 （五）固定化酶 将酶和酶菌体固定在载体上，制成不溶于水的固态酶，可以较长时间使用。 二 酶的提取 （一）预处理 ①胞外酶：将液体培养液过滤或离心除去菌体，所得的清夜即粗酶液。如果是固态发酵，用水或缓冲液浸泡，在离心或过滤除去菌体和杂质后得到粗酶液。 ②胞内酶：破碎细胞壁和质膜，制成无细胞提取液。 （二）酶的提取 由于不同的酶的等电点、pH、温度稳定性等性质不同，提取方法也不同。 1 水溶液 提取法 2 表面活性剂提取法 3 丁醇提取法 （一）浓缩 葡聚糖凝胶—分子筛浓缩法、聚乙二糖浓缩法、超滤膜浓缩法、盐析或乙醇沉淀后分离。 （二）去杂质 pH沉淀法、利用蛋白质热变性的温度差异、蛋白沉淀剂法。 （三）纯化 盐析法、有机溶剂沉淀法、层析法。 （四）结晶 当酶达到一定纯度后，在适当的温度下、pH下，逐渐加入(NH4)2SO4溶液，酶可以慢慢析出结晶，也可以加入某些有机溶剂析出结晶。 １.固定化酶：从筛选、培育获得的优良菌体中提取活性极高的酶，再用包埋法（或交联法、载体结合法、逆胶束酶反应系统）等方法将酶固定在载体上，制成不溶于水的固态酶，即固定化酶。 ２.固定化微生物：用固定酶的方法将酶活力强的微生物固定在载体上，即成固定化微生物。微生物本身是多酶体系的固定化载体，将整个细胞固定化更有利于保持原有活性。有死细胞固定化和生长细胞固定化两种。 ３.固定化酶和固定化微生物特性：性能稳定、降解有机物性能强、耐毒、抗杂菌、耐冲击负荷。 固定化技术 Ⅰ 固定化技术 Ⅱ 固定化技术 Ⅳ 第二节 微生物细胞外多聚物的开发与应用 微生物的胞外多聚物（Extracellular polymers, ECP）是微生物在一定的环境条件下，在其代谢过程中分泌的、包围在微生物细胞壁外的多聚化合物。包括荚膜、粘液层及其他表面物质。这些多聚物其成分为脂、脂肽、多糖脂、中性类脂衍生物等。 微生物细胞外多聚物可用作表面活性剂、絮凝剂或助凝剂、沉淀剂。 生物表面活性剂和生物乳化剂是具有亲水基和疏水基结构于一体的两亲化合物。生物表面活性剂分子中具有脂肪烃链构成的非极性疏水基和有极性的亲水基，如磷酸根或多羟基基团。可以改变两相界面的物理性质，降低表面张力。生物乳化剂不能显著降低两相表面张力，但对油——水界面有很强的亲和力，能够吸附在分散的油滴表面，防止油滴聚集，从而使乳状液稳定。 根据单一菌种微生物(纯种)细胞表面的解离层(胞外多聚物)性质不同可以划分为两类，即疏水性的R型(菌落为粗糙型)和亲水性的S型(菌落为光滑型)。凡具有R型解离层的微生物表现疏水性而自身发生絮凝、聚集而沉降，可将R型细菌应用于废水处理中。具有S型解离层的微生物表现出亲水性，均匀分散于水中，不易絮凝和沉降。 活性污泥中的微生物可能全由R型细菌组成，也可能有R型细菌和S型细菌共同组成，或者全部由S型细菌组成，这种活性污泥是亲水性还是疏水性，取决于两者的比例和它们的表面电荷。从而导致活性污泥的吸附能力、活性污泥与水之间的表面张力的不同，进而影响活性污泥对废水中成分的吸附力和废水的处理效果。 三 微生物絮凝剂和沉淀剂的开发与应用 微生物絮凝剂是一类由微生物在生长过程中产生的可使水体中不易降解的固体悬浮颗粒、菌体细胞及胶体粒子等凝集、沉淀的特殊高分子聚合物。微生物的絮凝作用最先由法国的Louis Pasteur在1876年研究酵母菌时发现的。 微生物絮凝剂的优点： (1)适应范围广，具有很好的除浊脱色作用，沉降效率高。 (2)可降解，其降解产物对环境无毒无害，不会产生二次污染，是一种高效安全的絮凝剂。 (3)能够产生絮凝剂的微生物种类多，生长快，易于采取生 物工程的手段实现产业化生产。 微生