糖基化去除大豆球蛋白免疫原性方法的优化.pdfVIP

动物营养学报２０１３，２５（４）：８８４８９０ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６２６７ｘ．２０１３．０４．０２９ 糖基化去除大豆球蛋白免疫原性方法的优化 谭　振　孙泽威 （吉林农业大学动物科学技术学院，长春 １３０１１８） 摘　要：为了优化糖基化去除大豆球蛋白免疫原性的方法，本试验采用果寡糖与粗提大豆球蛋 白进行干热法糖基化反应，选择不同的温湿度反应条件组合，测定各个反应条件下０～１２０ｈ产 物的蛋白质溶解状况及免疫原性去除效果。结果表明随着时间的推移，各组产物的蛋白质溶解 均有下降，而免疫原性去除效果增强，其中在６５℃、７５％相对湿度、蛋白质与糖摩尔比１∶１４时反 应６０ｈ条件下蛋白质溶解及免疫原性去除效果最为理想。该条件可以作为干热法糖基化反应 去除大豆球蛋白免疫原性的优化方法。 关键词：大豆球蛋白；糖基化；免疫原性；果寡糖 中图分类号：Ｓ８１６．９　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１００６２６７Ｘ（２０１３）０４０８８４０７ 　　大豆以其优质的营养和功能特性，广泛地应 改变大豆致敏结构、掩饰抗原致敏性并增强其功 用于食品与饲料行业。但是大豆中的抗原蛋白可 ［１０］ 能特性的方法已经被认可。Ｕｓｕｉ等 发现采用半 引起婴儿、仔猪、犊牛等幼龄动物过敏［１－２］，被认 乳糖和壳聚糖结合大豆蛋白，可降低大豆蛋白产 为是主要的食物过敏原，这在工业发达国家更加 生的过敏反应。为此，本研究旨在以果寡糖和大 突出。近年来，世界上普遍认为大豆已经成为了 豆球蛋白为原料，利用干粉糖基化方法，使抗原蛋 ［３］ 白与果寡糖发生有效的糖基化改性，通过观测糖 “健康杀手” 。大豆球蛋白（ｇｌｙｃｉｎｉｎ）和 －伴 β 大豆球蛋白（βｃｏｎｇｌｙｃｉｎｉｎ）是致敏性最强的大豆 基化前后对抗原蛋白的免疫原性变化和蛋白质溶 抗原蛋白，占大豆籽实总蛋白质的６５％～８０％，因 解状况，建立果寡糖与大豆抗原蛋白体外糖基化 此也是大豆中主要的抗原蛋白。其中大豆球蛋白 工艺，优化糖基化反应条件。 大约占大豆中总蛋白质的４０％，是一种含糖量（约 ［４］ 为０．８％）很少的聚合蛋白质 。随着科学研究的 １　材料与方法 不断深入，热处理、发酵、酶法水解、基因改造、农 １．１　试验材料 艺营养、浸提和糖结合等方法已被用来去除大豆 １．１．１　大豆球蛋白的分离和粗提 ［５］ ［１１］ 的致敏性 。这些方法中以美拉德反应遮掩致敏 　　参照 Ｓｅｔｓｕｋｏ等 的免疫法，并做部分修改， 性为基础的还原糖结合蛋白质形式以其前景广阔 对大豆球蛋白进行分离。取 １００ｇ脱脂大豆粉溶 和安全性高的特点逐渐进入人们的视线。以往关 于０．０３ｍｏｌ／Ｌ、ｐＨ８．０的２ＬＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液中， ［６］ ［７］ 于美拉德反应对贝类过敏原 、花生过敏原 、樱 搅拌１ｈ后于４℃、１００００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ。弃 ［８］ ［９］ ［５－１０］ 桃过敏原 、 －乳球蛋白 、大豆蛋白 等过 去沉淀后所得上清液用２ｍｏｌ／ＬＨＣｌ调节 ｐＨ至 β 敏原致敏性影响的研究，得到的结果是有争议的， ６．４，