真菌药敏培训-检验科.ppt

真菌检测药敏新方案 微生物项目 刘飞讲 解 纲 要 一、真菌概述 二、真菌临床检测的意义 三、安图真菌试剂盒 四、临床现状 五、安图真菌试剂盒特色 一、真菌概述 2. 真菌感染部位分类 4、念珠菌概述 念珠菌（Candida）是真菌中最常见的条件致病菌，又称假丝酵母，有些地方称为霉菌，医学上真菌多指的就是念珠菌。 念珠菌是单细胞真菌，类似酵母菌一样的圆形、椭圆形或带有发芽生出的孢子，由于培养时个个孢子连接如同串珠或念珠，故有念珠菌之名。 临床念珠菌中最具有检测意义的为白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌、克柔氏念珠菌等。 二、真菌临床检测的意义 1. 严峻形势： A. 北京：院内感染调查发现主要的致病菌有：革兰阴性杆菌(46.03%)、革兰阳性球菌(23.68%)、念珠菌属(21.9%)、假单胞菌属(13.15%)、肠球菌(11.84%)；院内感染总的死亡率为14.29%。 B. 据国外资料，育龄女性75％至少患过1次念珠菌性外阴阴道炎（VVC），其中40%～45%患 2次以上。 C. 近年来国内外深部真菌感染的发病率明显增多，其病死率可高达29％－60％。 2.临床科室及危害 ： C、呼吸科：真菌可引起支气管炎或肺炎，近年来真菌性肺炎的发病率逐步上升，肺部真菌病占内脏深部真菌病的60％以上； 三、安图真菌检测试剂盒 产品名称：真菌快速培养鉴定药敏试剂盒 目 前：产品完成注册检验及临床，正在产品报批 计 划：2013.4左右销售 包装规格： 20人份/盒 标本类型：男/女分泌物，痰，咽拭子等 贮存条件：2—8℃，有效期12个月 方法学：培养+药敏（培养是金标准，药敏是指导） 培养及鉴定：一次完成白念、光滑、克柔、热带培养鉴定检测（这四种菌临床感染率高，危害大，用药有差异，鉴定意义大） 药敏测定：10种临床常用抗真菌药（美国CLSI及欧洲EUCAST标准制定） 真菌鉴定药敏板各孔示意图 临床评估数据 在郑大二附院和河南省武警总队医院进行综合评价： 本次临床考核共对比检测样本397份，其中痰标本195份，泌尿生殖道分泌物标本 151份，尿样本51份，临床研究结果显示，考核试剂盒与对比试剂Ⅰ的鉴定符合率为96.98%； 抗生素药敏检测结果考核试剂盒与对比试剂Ⅱ的整体符合率为91.94%，两者有较高的一致性。 四、临床现状 1.镜检法 优点：直接镜检方法简便 ,成本低,在临床中使用最为广泛。 问题：敏感性50%，漏检严重，且不能鉴定及药敏检测。 2.血清学方法 2.1.抗体:灵敏度、特异性差，临床少见。 2.2.抗原:新开展项目，灵敏度低，特异性不好. 2.3.代谢产物：葡聚糖检测，测血，无菌体液. 问题：特异性、灵敏度方面，且不能鉴定及药敏测定。 3.PCR法 需要特殊设备，成本高，要求严格。 问题：需设备及其繁琐性问题，不能做药敏检测，现在医院没有使用。 4.培养法 是公认的敏感方法，是流行病学调查、新的方法评价的金标准，也是WHO推荐的真菌实验室诊断的唯一一种方法。当前临床主流方向： 4.1、手工鉴定类 4.2、仪器鉴定类 问题：检测周期长，个别需要先培养再鉴定，药敏需要另测。 二）常规药敏检测方法 1.微量稀释法 用法：液体培养基配制一系列稀释度的药液，然后接种受试菌株的菌悬液，经一定温度孵育后，测定药物在体外抑制真菌生长的最低药物浓度。 问题：测纯菌、繁琐。 2.E-test法 用法：利用琼脂技术进行的MIC测定法，它结合扩散法和稀释法，用特殊技术将抗菌药物在一试剂条上形成一个定量的连续梯度， 问题：价格高，测纯菌。 3.纸片扩散法 用法：先分离纯菌然后涂布平板用药敏纸片检测 ； 问题：测纯菌，周期长。 4、试剂盒法 4.1.手工类试剂盒 4.2.半自动仪器 问题：测纯菌，或需要设备，周期长。 小结：综合对比 五、安图真菌试剂盒特色 收费价格：各省都有相关收费标准，抽查几省收费如下： 河南 真菌培养及鉴定　 50 43 35 真菌药敏试验　 10 9 7 新疆 真菌培养及鉴定 55 50 45 真菌药敏试验 50 45 40 海南 真菌药敏试验 56 53 47 真菌培养及鉴定 70 67 59 山西 真菌培养及鉴定 30 26 20 鉴定加收20元 真菌药敏试验 20 17 13 仪器法加收30元 广东 真菌药敏试验 70 真菌培养及鉴定 70 上海 真菌药敏试验 30 真菌培养及鉴定 15 浙江 真菌药敏试验 60 真菌培养及鉴定 50 武汉 真菌药敏试验 80 70 60 真菌培养及鉴定 60 55 50 天津 真菌药敏试验