4 细胞破碎.ppt

* 活塞流：称平推流，理想 置换流，理想排挤流或栓 式流等，是理想流动的一 种，其特征是:在流动方向 上，即轴向不存在混合， 而在径向则达到完全混合 ，因而在垂直于流动方向 的横截面上，其流速均一， 浓度均一。 * 扩张床是利用吸附剂的粒径和密度分布，当料液从扩张床底部泵入时，吸附剂能在扩张床中膨胀，相互间的空隙增大，并且形成了一梯度分布，限制了颗粒的运动。液相流动为平推流，从而得到稳定的扩张床，目标产物被吸附在扩张床内的吸附剂上，从而实现了料液的初步分离。 扩张床的顶部装有高度调节器，流动相从床底流体分布器输入，床内吸附剂产生膨胀。扩张床具有较高的空隙率，床层压降小，可以允许料液中细胞、细胞碎片等固体颗粒的通过，并且吸附剂的利用率高，分离效率高。 吸附基质要求 　　1.吸附剂的尺寸和密度应保证其终端流速与料液中 需除去的固形颗粒间有明显的差异； 　　2.吸附剂必须有一定的粒径和密度分布，在扩张床中会形成稳定的分级，从而减小固液相问的返混； 　　3.吸附剂应具有良好的孔道结构，不易被料液中的脂类、核酸和杂蛋白等生物物质污染； 　　4.吸附剂应具有特异性吸附的配基，使吸附剂对目标产物具有较高的吸附容量； 　　5.吸附剂应具有较高的化学稳定性和良好的机械强度，其中较高的化学稳定性可以保证吸附剂可以承受较苛刻的洗脱条件，而良好的机械强度可延长吸附剂的使用寿命； * 常用的扩张床吸附基质 　　复合吸附剂：琼脂糖—石英砂、琼脂糖—不锈钢、葡聚糖—硅胶、纤维素—二氧化钛等 。 　　复合的吸附剂同时兼顾了粒径、密度、孔径和流速范围、吸附动力学，特别是传质限制，具有良好的应用前景 　　高密度的材料 ：多孔玻璃、多孔氟化二氧化锆、全氟聚合物等 　　高密度、小粒径、薄壳型的核壳型基质和高密度、大孔径、高比表面的混合型金属氧化物基质在应用上有很大的优势。 * 吸附介质颗粒在向上流动的上清作用下扩张起来，上清中的目标蛋白被吸附于介质上，而细胞及碎片通过柱子而流出，而洗脱目标蛋白时从反方向将吸附介质压紧，再用洗脱液将目标蛋白洗下来。 操作分为五个部分: (1)平衡(equlibration)、(2)吸附(adsorption)、(3)冲洗(washing)、(4)洗脱(elution)和(5)再生（regeneration)。 * * 高速珠磨机工作原理 磨室内放置玻璃小珠，装在同心轴上的园盘搅拌器高速旋转，使细胞悬浮液和玻璃小珠相互搅动； 细胞破碎是由剪切力层之间的碰撞和磨料滚动引起 在出口处，旋转园盘和出口平 板之间的狭缝很小，可阻挡玻 离小珠，使不被料液带出。 由于操作过程中会产生热量， 故磨室还装有冷却夹套，以冷 却细胞悬浮液和玻璃离小珠。 * Netzsch LM-20型珠磨机 A-具有冷却夹套的圆筒形磨室 B-具有冷却装置的搅拌轴和圆盘 C-环形震动侠缝分离器 D-变速马达 1和2料液进出口 3和4 搅拌冷却剂进出口 5和6磨室冷却剂进出口 园盘以两种位置交错地安装在轴上， 一种处于径向，一种与轴倾斜， 径向盘使磨料沿径向运动，倾斜盘则产生轴向运动。 由于交错的运动，提高了破碎效率。 * 珠磨机破碎作用方程 破碎作用是相对于时间的一级反应速度过程，符合下列公式： ln[1/(1-R)]=Kt R ： 破碎率；K： 一级反应速度常数；t： 时间。 K与搅拌转速、细胞悬浮液浓度和循环速度、玻璃小珠装量和珠体直径，以及温度等相关。 珠磨法的破碎率一般控制在80%以下：降低能耗、减少大分子目的产物的失活、减少由于高破碎率产生的细胞小碎片不易分离而给后续操作带来的困难。 * 3）超声波破碎 超声波破碎法（Ultrasonication)利用超声波振荡器发射的15-25kHz的超声波探头处理细胞悬浮液。 超声波振荡器以可分为槽式和探头直接插入介质两种型式，一般破碎效果后者比前者好。 超声波的细胞破碎效率与细胞种类、浓度和超声波的声频、声能有关。 * 超声波破碎的机理 JY92-II D超声波 细胞粉碎机 一般认为在超声波作用下液体发生空化作用（cavitation), 液体中局部空穴的形成、增大和闭合产生极大的冲击波和剪切力，引起的粘滞性旋涡在细胞上造成了剪切力，使细胞内液体发生流动，从而使细胞破碎。 操作过程产生大量的热，因此操作需在冰水或外部冷却的容器中进行。 * 超声波破碎的适用范围 超声波破碎是很强烈的破碎方法，适用于多数微生物的破碎。 一般杆菌比球菌易破碎，G-细菌比G+细菌易破碎，对酵母菌的效果较差。 但超声波产生的化学自由基团能使某些敏感性活性物质失活。 超声波破碎的有效能量