第四章_动物细胞制药-2.pdf

动物细胞的培养条件 年份 技术发展概要 1907年 Harrison 创立体外组织培养法 1951年 Earle等开发了能促进动物细胞体外培养的培养基 1957年 Graff用灌注培养法创造了悬浮细胞史上绝无仅有的 1×1010~2 ×1010cells/L的记录，标志着现代灌注概念的诞生。 1962年 Capstil成功地大规模悬浮培养小鼠肾细胞（BHK），标志着动 物细胞大规模培养技术的起步。 1967年 Van Wezel用DEAE-Sephadex A50为载体培养动物细胞获得成 功。 1975年 Kohler和Milstein成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓瘤细胞而 产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。 1986年 Demo Biotech 公司首次用微囊化技术大规模培养杂交瘤细胞 生产单抗获得成功。 1989年 Konstantinovti 首次提出大规模细胞培养过程中的生理状态控 制，更新了传统细胞培养工艺中优化控制之理论。 名称 价格（USD/kg） 用途 长春新碱 ≦1000000 抗肿瘤药物 长春花碱 ≦3500000 抗肿瘤药物 保加利亚玫瑰油 2000-3000 香料、调味品 毛地黄毒苷 3000 心机能障碍 辅酶Q-10 600 强心剂 可待因 650 麻醉剂、镇痛剂 紫草宁 4000 消炎、抗菌、染料 苦橙花油 1125 香料 吗啡 600 麻醉剂、镇痛药 当归根油 800 香料、中药 春黄菊油 500 香料、药物 茉莉 500-2000 香料 动物细胞培养 细胞培养是指离体细胞在无菌条件下分裂、生长，在整个 培养过程中不出现分化，不再形成组织。 组织培养是指动物体系的某种组织，在体外培养时细胞一 直保持原来已分化的特征，该组织的结构和功能持续不发 生明显变化。 原代培养是指直接从有机体得到的组织或将其分散成细胞 后开始的培养。 传代培养或再培养是转移部分初代培养物到新鲜培养基中 的培养。 动物细胞培养与微生物培养区别 动物细胞无细胞壁，且大多数哺乳动物附着在固体或半固 体的表面才能生长。 对营养的要求较高，往往需要多种氨基酸、维生素、辅酶、 核酸、嘌呤、激素和生长因子等，其中很多成分系用血清、 胚胎浸出液等提供，在很多情况下还需加入10%的胎牛或 新生牛血清。 动物细胞对环境敏感，包括pH、溶氧、温度、剪切应力 都比微生物有更严的要求，一般须严格的检测和控制。 动物细胞生长缓慢，对环境条件要求严格。不仅需要严格 的防污染措施，同时还要用空气、氧、二氧化碳和氮的混 合气体进行供养和调节pH。 • 原代培养：单个细胞 十代左右 • 传代培养：原代培养细胞 40~50代左右 • 细胞株：10到40 、50代的细胞