脂肪酶在有机溶剂中催化酯合成和酯交换反应.pdfVIP

维普资讯 V01．12 高 等 晕 拄 化 学 学 报 No．11 199 1年 11_日 CHEM AL JOURNALOFCHINESEUH1vERsI1E 8 l5S5～ l557 脂肪酶在有机溶剂中催化酯合成和酯交换反应 曹淑挂 刘 占斌 冯 雁 丁忠田 程玉 华 (吉林大学酶工程冒家重点实睑皇 ．长春 ．130023) 摘要 报道 了猪陂脂肪晦在冻干时的pH值、有机溶剂的枉性、反应 隶境的音水量、蕾度以及鹿 扮磋链的长度和主链舛碡在有机相中催化活性 的影响规律．州用该酶台成 了具有政瑰香味 ，月挂 醚香茅醋和辛醚香茅酯． 关键词 脂肪晦 硝台成 醋交换 酶作为催化剂具有效率高、条件温和、专一性强等特点。但是 ，作为生物谜化剂的酶用 于有机相的催化反应却受许多条件的限制．目此，该项研究受到人们的重视u ．利ff{脂肪 酶在有机相 中催化酯合成和酯 交换反应制备光学活性醇、大环 内酯 l‘、糖酯-J、生理 活性 肽 ]．将代替医药、食品和精细化工中烦杂的有机台成中问体．本文埘貉胰脂肪酶在有机溶剂 中催化酯合成和酯交换反应的条件进行了研究． 1 脂肪酶的酯合成和酯交换活力测定 猪胰脂肪酶 {美 国SigmaChemiCalCornpa— n 粗酶．在用无水 CaCI。及 0．4nm分子筛除 水的有机介质中加入底物和酶粉，在 40C磁力 f 搅 拌下反应 24h．用 高压液相 色谱 (Waters Co)检测底物峰面积的城少或产物峰面积的增 加 (围 1)，计算酶活力 (nmol／min·mgPr)． 2 ptI值对酶在有机介质中活力的影响 将粗酶粉 lg分别溶于 10mL不同 pH的 磷酸缓冲液 (O．。2rod~L)中，冷冻干燥。在无水 苯中催 七『硬脂酸丁醢和月桂 醇的酯交换反应 (20℃)．反应 中脂肪酶活力与酶冻干时 pH值 有关(图 2)，最适 pH为 7．7．与水相中酶的懿 适 pH一致．因为在有机溶剂中酶分子表面含 圉1 IIPLC的酯台成 (1l2)和酯交I盘反应 【3，4) 有～单分子水层 ，遗层 “必需水”是维持酶陛化 (1)月挂醴与月拄静堤旨 活性构象所必需的 ．只有在特定 的pH条件 2‘)脂肪酶与 ‘1)中物蘑怍用 2{h(4o~)· 下 ，酶分子活性 中心周 围的离子基 团才能处于 f3)屉挂 与硬膳酸丁穑混台I ({)脂肪砖与r3)中斯质怍用 24h(40C)． 最佳的离子化状1态，有利于酶活性的充分发挥． 收稿 日期 1990—10O6．联系人 曹淑隹 *国家 自然科学基金资助课题． 维普资讯 衰 l 脂肪馥在各种有机溶剂中的活性 姜 奢 DH 田2 馥冻干时的pH值与馥活力的美系 3 酶活性与含水量的关系 在 0．4nll1分子筛除水后的无水苯中，酶粉的醇交换反应活力最高 (8．0nmollmin·mg Pr)．在除水后体系中加入 0．2 (V／I：)的水后 ，酶粉牯结，酶活力下降}当加入 0．6 的水 后，酶粉完全聚集，无活力．这是由于水是酶失活的必需条件口]，过量的水促进 了有机溶剂 对酶的失活作用}也阻止了有机楣中鹭合成和醋交换反应的进行． 4 酶活性与溶剂极性的关系 有机介质中生物催化一般遵守下列规律 [I】，(1)lgP~2的极性溶剂不适合生物催化系统I (2)21gP4的溶剂对酶表面水层的干扰不大}(3)tgP4的溶剂不干扰酶的必需水层，酶 能保持活性构象．本文中猪胰脂肪