3柱色谱技术.pptVIP

5.3 吸附色谱(adsorption chromatography) 吸附色谱的固定相为吸附剂，吸附剂表面的活性中心具有吸附能力。混合物被流动相带入柱内，依据固定相对不同物质的吸附力不同，而使混合物分离的方法，称为吸附色谱法。  5.3.1原理： 1、吸附是利用吸附剂对液体或气体中某一组分具有选择性吸附的能力，使其富集在吸附剂表面的过程。 利用溶质与吸附剂之间的分子吸附力(范德华力，包括色散力、诱导力、定向力以及氢键)的差异而实现分离 吸附剂由载体和配位体组成。 吸附过程通常包括：待分离料液与吸附剂混合、吸附质被吸附到吸附剂表面、料液流出、吸附质解吸回收等四个过程。 吸附柱色谱法吸附过程是样品中各组分的分子（X）与流动相分子（Y）争夺吸附剂表面活性中心（即为竞争吸附）的过程。利用被分离组分在固体表面活性吸附中心吸附能力的差别而实现分离。 流动相中组分的分子Xm与吸附在吸附剂表面的流动相分子Ya相置换，结果组分的分子被吸附，以Xa表示。流动相分子回到流动相之间，以Ym表示。吸附平衡常数称为吸附系数（Ka）,可近似用浓度商表示： 因为流动相的量很大，[Ym]n/[Ya]n近似于常数，且吸附只发生于吸附剂表面，所以，吸附系数可写成： 式中，Sa为吸附剂的表面积，Vm为流动相的体积。吸附系数与吸附剂的活性，组分的性质和流动相的性质有关。 2、吸附等温线 概念：在一定温度下，当吸附过程达到平衡时，其吸附量与浓度之间的函数关系称为吸附等温线。  吸附等温方程 蛋白质分离提纯时适合此吸附方程。 5.3.2常用吸附剂 根据所用吸附剂和吸附力的不同，吸附色谱可分为无机基质吸附色谱（多种作用力）、疏水作用吸附色谱（疏水作用）、共价作用吸附色谱（共价键）、金属螯合作用吸附色谱（螯合作用）、聚酰胺吸附色谱（氢键作用）等，这些色谱分离方法尽管其作用机理和作用力不同，但都可看作是可逆的吸附作用。 5.3.2.1对吸附剂的要求 吸附剂的表面积、含水量、颗粒大小等都对分离效果有一定的影响，因此对吸附剂有如下要求： ①表面积，每克吸附剂有200-800m2表面积，其线性容量较大，有一定的吸附能力； ②含水量，吸附剂含水量小，吸附能力强。因此水通常作为极性吸附剂的减活剂； ③吸附剂与流动相（样品）不发生化学反应； ④吸附剂颗粒直径适宜，一般吸附剂的粒径为100-200目或200-300目。 吸附剂通常应具备以下特征：对被分离的物质具有较强的吸附能力、有较高的吸附选择性、机械强度高、再生容易、性能稳定、价格低廉。 5.3.2.2常用吸附剂种类 1、活性炭： 含碳原料经碳化和活化后便成为活性炭。是一类具有吸附性能的碳基物质的总称，具有多孔结构和很大的比表面。 活性炭性能稳定，抗腐蚀，常用于食品工业的脱色、脱臭、净化，也用于环境保护中的三废处理等。 a.是非极性吸附剂，因此对非极性溶质在水中吸附能力大于有机溶剂中的吸附能力。 b.当（洗脱）溶剂的极性降低时，则活性炭对非极性溶质的吸附能力随之减弱； c.从活性炭柱上洗脱被吸附物质时，溶剂的洗脱能力将随溶剂极性的降低而增强。 活性炭吸附色谱应用实例 芙蓉菊寡糖片段的制备 芙蓉菊在我国广东民间用其水煎液防治糖 尿病，防治效果好。而关于芙蓉菊的药用成分，还未见任何形式的报道。 柱层析是分离寡糖最有用的方法。常用的 手段是利用选择性吸附剂，如酸性硅胶和活性炭，前者分离寡糖衍生物，后者分离游离态寡糖。 2、硅胶 是一种坚硬、多孔结构的固体颗粒，分子式为SiO2.H2O, 制备时用硫酸处理硅酸钠水溶液使之生成凝胶，经水洗、除硫酸后干燥即为硅胶。 硅胶易吸附极性物质（水、甲醇等），而难于吸附非极性物质。 硅胶作为吸附剂有较大的吸附容量，分离范围广，能用于极性和非极性化合物的分离，如有机酸、挥发油、黄酮、氨基酸、皂甙等。 氧化铝：适宜分离植物中的碱性成分如生物碱。 5.3.3流动相及其选择 流动相的洗脱作用实质上是流动相分子与被分离组分分子竞争占据吸附剂表面活性吸附中心的过程。 强极性的流动相分子因占据极性中心的能力强，而具有强的洗脱作用； 非极性的流动相分子竞争占据吸附活性中心的能力弱，洗脱作用就弱。 因此，为了使样品中吸附能力稍有差异的各组分得到分离，就必须根据样品的性质、吸附剂的活性选择适当极性的流动相。 （1）被测物质的结构、极性与吸附力 物质的结构不同，其极性也不同，在吸附剂表面的吸附力也不同。 常见化合物的极性（吸附能力）有下列顺序： 烷烃 烯烃 醚 硝基化合物 二甲胺 酯 酮 醛 胺 酰胺 醇 酚 羧酸 （2）流动相的极性 流动相的洗脱能力主要是由其极性决定，强极性流动相占据吸附中心的能力强，其洗脱能力强，使组分的k值小，保