人β防御素Ⅱ论文人β防御素Ⅱ人类表皮生长因子受体2融合蛋白单链抗体.docVIP

人β防御素Ⅱ论文：抗HER2小型化抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达及其生物活性初步研究 【中文摘要】利用小分子泛素样修饰蛋白(Small ubiquitin-like modifier, SUMO)融合表达系统,在大肠杆菌Origami B (DE3)中表达人β防御素Ⅱ(human (3 defensin 2, HBD2)与抗Her-2单链抗体(4D5 scFv)的融合蛋白。初步测定其体外抗菌抗肿瘤活性及特异性亲和能力,为日后用于靶向治疗HER2高表达的肿瘤疾病提供研究基础。方法：将编码SUMO和HBD2-4D5的DNA片段克隆到原核表达载体pET-3c中,并转化E.coli Origami B (DE3),抗生素筛选重组子。以终浓度为1 mM IPTG进行诱导表达,通过组氨酸亲和凝胶层析(Ni-NTA sepharose)、特异性蛋白酶(SUMO protease)酶切和分子筛(Sephadex G-25)联用的方法纯化蛋白。琼脂弥散抑菌法检测融合蛋白抑菌活性,MTT法检测融合融合蛋白对乳腺癌细胞的细胞毒性,细胞流式技术检测融合蛋白对乳腺癌细胞周期的影响,细胞免疫荧光检测融合蛋白与HER2蛋白的结合能力。结果：成功构建表达载体pET-3c-sumo-hbd2-... 【英文摘要】:A Prokaaryotic recombinant vector expressed fusion protein SUMO-HBD-4D5 was constructed and transformed into E. coli. The target proteins were purified and their biological activities of antibacterial and anti-cancer was analyzed.METHODS:The cDNA fragments coded SUMO and HBD2-4D5 were amplified by PCR respectively and inserted into vector pET-3c to construct the recombiant expression vectors. Recombinant proteins, HBD2-4D5 was purified using the combination of Ni-NTA Sepharose FF, dige... 【关键词】人β防御素Ⅱ 人类表皮生长因子受体2 融合蛋白 单链抗体 【英文关键词】HBD2 HER2 Fusion protein Single chain antibody 【索购全文】联系Q1：138113721 Q2：139938848 同时提供论文写作一对一辅导和论文发表服务.保过包发 【目录】抗HER2小型化抗体与人β防御素Ⅱ融合蛋白的表达及其生物活性初步研究 摘要 4-6 ABSTRACT 6-7 目录 8-10 第一章 文献综述 10-20 1 乳腺癌现状 10 2 HER2研究进展 10-11 2.1 HER2概述 10 2.2 HER2与乳腺癌相关性 10-11 3 抗体药物研究进展 11-14 3.1 抗体药物的概述 11-12 3.2 HER2靶向治疗单克隆抗体赫赛汀 12-13 3.3 小型化抗体的发展 13-14 4 防御素研究进展 14-16 4.1 防御素概况 14 4.2 人β防御素Ⅱ的结构与潜在抗肿瘤机理 14-16 5 SUMO蛋白融合系统 16-18 5.1 SUMO概述 16 5.2 SUMO作为高效表达重组蛋白的融合标签 16-18 6 课题思路 18-19 7 技术路线 19-20 第二章 基因的克隆、表达及蛋白质的纯化鉴定 20-40 1 实验仪器和材料 20-21 2 实验方法 21-32 2.1 融合蛋白的分子设计与结构预测 21 2.2 融合蛋白重组表达载体的构建与克隆 21-28 2.3 融合蛋白的表达 28-29 2.4 融合蛋白的纯化鉴定 29-32 3 实验结果 32-40 3.1 融合蛋白的分子设计与结构预测 32 3.2 融合蛋白重组表达载体的构建与克隆 32-34 3.3 融合蛋白的表达 34-36 3.4 融合蛋白的纯化鉴定 36-40 第三章 融合蛋白体外生物活性检测 40-47 1 实验仪器和材料 40-41 2 实验方法 41-42 2.1 融合蛋白的抑菌活性检测 41 2.2 Western Blot检测SK-BR-3和MDA-MB-231细胞表面HER2蛋白的表达 41 2.3 MTT检测融合蛋白对SK-BR-3和MDA-MB-231细胞杀伤活性 41-42 2.4 流式细胞技术检测