2012级全日制研究生分生作业.docVIP

基因诊断作业 名词解释： 基因诊断：又称分子诊断，即通过分子生物学和分子遗传学技术，直接检测遗传物质结构 和表达是否异常，从而对疾病做出判断的方法。即实时监测 PCR 扩增产物并进行解析的方法PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 问答： 基因诊断常用到的方法有哪些？ 答：（1）DNA 诊断：核酸分子杂交聚合酶链式反应（PCR）限制性酶切图分析DNA 测序DNA 芯片技术。 2）RNA 诊断：反转录 PCRNorthern 印记杂交实时荧光定量 PCR表达谱基因芯片。PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸， 两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。 探针完整时， 报告荧光基团发射的荧 光信号被淬灭荧光基团吸收；PCR 扩增时，Taq 酶的 5′→3′外切酶活性将探针酶降解， 使报告荧光基团和淬灭基团分离， 从而荧光监测系统可接收到荧光信号， 即每扩增一条 DNA 链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的积累与 PCR 产物形成完全同步。 答： 镰状细胞贫血的基因诊断原理在于它的血红蛋白中的β 珠蛋白基因发生了突变， 导致β 链第 6 位谷氨酸变为缬氨酸。基于 A→T 的变换，改变了限制性内切酶的位点，因此在酶解 正常人 DNA 和患者 DNA 后再用标记的β 珠蛋白基因为探针做 Southern 杂交时，就会出现 不同的 DNA 条带。Β 654 地中海贫血是指发生在β 珠蛋白基因第二外显子第 654 位 C→T 突变而引起的一种地中海贫血。该突变在 IVS-第 654 位上出现的单碱基取代产生了一个 新的 GT 二核苷酸， 联同旁侧序列构成了一个新的 5′端一场的剪切位点， 同时还激活了 IVS第 579 位处 3′端隐匿的剪切位点，从而将 IVS-nt579～nt652 之间一段 73bp 的内含子 序列作为额外的外显子插入到外显子 2 和外显子 3 之间，产生了一场的β 珠蛋白 mRNA。 在异常剪切的 mRNA 中存在一个提前的终止密码子，使翻译提前中止而产生截断的、不稳 定的异常珠蛋白，导致了正常β 珠蛋白链合成减少。 1、 染色体重排：RET/PTC基因突变与甲状腺乳头状癌（PTC）的发生关系密切。RET/PTC基因突变变现为染色体内DNA的重排，重排后的RET基因由不同启动子启动该基因的过度表达。有研究显示RET/PTC重排在有辐射接触史的PTC患者中常见，并且RET/PTC重排有关的PTC患者较少进展为PDTC或者ATC，在未分化甲状腺癌中也较少发现。 2、 RAS突变：RAS编码的蛋白能够传递生长信号，结合 GTP 时为活化状态，而结合 GDP 时为失活状态，正常状态下 RAS 蛋白与 GDP结合。参与MAPK 途径的信号传导。激活 RAS 的机制主要是点突变，导致其 GTPase 活性下降，使其保持持续活化状态，激活下游 MAPK 级联反应，导致细胞大量增殖而发生恶性转化。RAS 突变在滤泡性甲状腺癌、PDTC、ATC患者中常见，而在PTC患者中较少见。 3、 BRAF 基因突变和MAPK(促分裂原活化蛋白激酶)信号转导途径：BRAF 基因突变是在人体肿瘤中导致的MAPK信号通路异常激活的主要原因。BRAF突变的蛋白质产物中第600位的缬氨酸被谷氨酸替代，该点突变可导致激活BRAF激酶，继而激活MAPK下游传导通路。该基因突变在PTC和PTC起源的ATC中常见。大量临床研究表明BRAF基因突变和PTC的侵袭、转移和复发有关，并且与PTC患者细胞摄碘能力的的散失也有关联。 4、 磷脂酰肌醇-3-激酶信号通路（PI3K/Akt pathways）：P13K/Akt细胞信号通路与细胞的生长、增殖、生存及肿瘤发生有关。Akt有三种形式，Akt-1,Akt-2和Akt-3。激活的Akt磷酸化下游反应蛋白，并可放大信号级联，促进细胞异常增殖和抑制凋亡。而PTEN可以使PIP3去磷酸化，从而阻断该信号通路。Akt-1,Akt-2在甲状腺癌中是最常见及重要的。有报道，在甲状腺癌中发现PIK3CA的复制和放大，尤其是FTC和ATC。此外，PIK3CA突变在ATC中特别常见，在已分化甲状腺癌中少见但可以发生。PI3K通路中大量基因的改变，包括PIKCA突变和放大，Ras突变和PTEN突变被发现有相对较高的患病率，尤其是FTC和ATC肿瘤。上述改变可同时存在，还可以与BRAF突变同时在甲状腺肿瘤患者中发现，尤其是ATC。在81%ATCs中发现可同时激活MAP通道和PI3K通道的基因改变。针对多个信号通道，尤其是MAP激酶和PI3K/Akt通道，在甲状腺癌中可能是一种有效和必要的治疗策略。 5、