MiR-19反义核酸与CD133+HT29细胞亚群对多-中国现代应用药学.PDF

MiR-19 反义核酸与 CD133+ HT29 细胞亚群对多柔比星敏感性关系的 研究  潘海强，沈锋，崔焌辉，蔡珂，都志军(浙江省立同德医院肛肠科，杭州 310012) 摘要：目的 探讨miR-19 反义核酸与CD133+ HT29 细胞亚群对多柔比星敏感性的关系并研究其机制。方法 用RT-qPCR 方法检测miR-19 在结直肠癌细胞中的表达水平。流式细胞术检测miR-19 反义核酸和多柔比星对HT29 细胞系的CD133+ + 细胞亚群种群比例的影响。MTT 法检测miR-19 反义核酸对多柔比星杀伤CD133 HT29 细胞亚群能力的影响。利用生物 + 信息学及Western blot 法验证miR-19 是否调节CD133 HT29 细胞亚群中PTEN 的表达。运用Western blot 、免疫共沉淀、 流式细胞术研究miR-19 反义核酸影响多柔比星疗效的信号通路。结果 结直肠癌细胞系的miR-19 表达水平显著高于正 常结直肠上皮细胞系，并且CD133+ 细胞中的miR-19 表达水平显著高于常规结直肠癌细胞。多柔比星体外单独治疗能提 + + 高HT29 细胞系中CD133 细胞亚群的比例，然而联用miR-19 反义核酸后CD133 HT29 细胞亚群的种群比例显著下降。 MTT 结果表明miR-19 反义核酸可显著增强多柔比星对CD133+ HT29 细胞亚群的杀伤活性。Western blot 实验表明miR-19 + 的靶基因可能为PTEN 。MiR-19 反义核酸可显著抑制CD133 HT29 细胞亚群PI3K 、AKT 和Bad 的磷酸化，增强Bad 与 Bcl-2 和Bcl-xl 的结合，从而提高CD133+ HT29 细胞亚群对多柔比星依赖的凋亡信号的敏感性，促进caspase-9 和caspase-3 的活化。结论 MiR-19 反义核酸通过PTEN/PI3K/AKT/Bad 途径提高CD133+ HT29 细胞亚群对多柔比星的敏感性。 关键词：miR-19 ；PTEN；多柔比星；结直肠癌干细胞；Bad 中图分类号：R965.2 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2017)02-0215-06 DOI: 10.13748/ki.issn1007-7693.2017.02.014 + Study the Relationship Between MiR-19 Antisense Oligonucleotides and the Sensitivity of CD133 HT29 Cell Subsets to Doxorubicin PAN Haiqiang, SHEN Feng, CUI Junhui, CAI Ke, DU Zhijun(Department of Anus-intestines, Tongde Hospital of Zhejiang Province, Hangzhou 310012, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To investigate the relationship between the miR-19 and the sen