杆菌肽ELISA检测试剂盒的研制.pdfVIP

M南 放鹰廛 2013年第5期(总第177期) doi：10．3969／j．issn．1006-4907．2013．05．002 杆菌肽 ELISA检测试剂盒的研制 刘宏军 ，。冯才伟2※。王瑟如 ’，韩京朋 ，丁小梅 ，钱宏光 ’ (1．江苏省泰州市姜堰区动物卫生监督所，江苏泰州225500；2．北京勤邦生物技术有限公司，北京 102206) 摘 要 ：为研制杆菌肽 ELISA快速检测试剂盒 ，以检测动物性食品中杆菌肽残 留量 。我们在杆菌肽单克隆抗体基础 上 ．用 间接竞争酶联 免疫吸 附法测定试剂 盒的各项指标 。试验表 明，试 剂盒标 准 曲线的线性 范围为 1．0～81．0ug／L，回归方程为 一2．0574x+1．0956(R2=0．9967)，抗体对杆菌肽 50％的抑制浓度为 3．9U L；对猪 肉、猪肝 中杆菌肽的最低检测限为200edkg，对牛奶 中杆菌肽的最低检测限为261．1g／L；猪肉、猪肝、牛奶样品 添加回收率范围为 70．2％-99_3％，批 内变异 系数范围为 3．4％～13．0％，批间变异系数 范围为 7．9％～10．4％，可在 2～8℃条件下保存 12个月。结果显示该试剂盒各项指标符合相关技术要求 ，具有快速 、灵敏、稳定的特点。 关键词：杆菌肽：试剂盒：猪肉：猪肝：牛奶 ． 中图分类号：$859．34；TS207．51 文献标识码：A 文章编号：1006—4907(2013)05—0003—04 杆菌肽 ，又称枯草菌肽 ，是 由地衣芽孢杆菌或 留限量》中对杆菌肽药物最高残留限量(MRL)作 枯草杆菌变种的培养液分离而得ll_。对革兰氏阳性 出 了规定 ：牛奶 中杆菌肽最 高残 留限量 为 菌有较强的抑制作用，抗菌谱与青霉素G相似，被 500 g／kg，在牛 、猪 、禽 的可食用组织 中为 广泛用于治疗家禽、猪 、牛等肠道、呼吸道、泌尿系 500 g，l( 。 统感染 ，作为兽药和饲料添加剂 ，具有抑菌 、杀菌 目前 ，国外对于动物性食品中杆菌肽药物残 和明显的促生长作用 ，是 目前国内外广泛用于饲 留检测方法的报道为微生物法、薄层色谱法、免疫 料中的一种新型抗生素圆。 、 学法、毛细管电游泳法 、高效液相色谱法等 ，国内 杆菌肽属于多肽类抗生素，具有肾和神经毒 报道的方法主要是微生物法，但其操作繁琐、灵敏 性，其在动物组织中的残留会通过食物链传递给 度低、重珊生『差 。以免疫学检测技术为基础，建立 人类，其产生的毒副作用会对人体产生直接的危 起来的酶联免疫检测试剂盒可为建立监控动物性 害，为此其安全问题已经 日益引起人们的关注 。我 食品中杆菌肽残留提供技术支持。 国农业部235号公告 《动物性食品中兽药最高残 1材料与方法 豆通报，2001，(2)：24． J【J．养殖技术顾问，2004，(2)：45． 8【】李善仁，陈济琛，胡开辉，等．大豆肽的研究进展[J]．中 1【5】黄永彤，黄 自然，黄建清，等．抗菌肽与抗生素饲喂肉鸡 国粮油学报，2009，24(7)：142—147． 的效果比较 J【]．广东饲料，2004，13(2)：24~25． [9]Reieha~F，NeundorfI．Improvingtheproteolytic [16】郭设平，王沂蒙，姜玉坤，等．鸡胸腺肽的提取及其生物 stabilityofCPPbymodulationofthepeptidebackbone 学活性的初步研究fJ]．中国家禽，2008，30(4)：12～15． J【】．JOURNALOFP