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慢性间歇缺氧兔模型肝组织cDNA文库构建.pdf
中南大学学报(医学版)
．，C m ( ) 2o07，32(6)
1O13
慢性间歇缺氧兔模型肝组织cDNA文库构建
吴悦陶，刘瑞洪，杨 宇，罗荧荃，荣 耀
(中南大学湘雅二医院老年病科，长沙41001 1)
[摘要] 目的：构建抑制性差减cDNA文库筛选鉴定慢性间歇性缺氧兔模型肝脏相关基因。方法：
选取24只兔随机分成4组，分别为普通饲料喂饲组，高脂饲料喂饲组，间歇性缺氧组和高脂并间歇性缺
氧组。提取高脂组和高脂并间歇性缺氧组兔肝脏组织mRNA，酶切 cDNA，分别与不同的接头连接。经过
两轮差减杂交和两次抑制性PCR后得到两者之间差异表达的cDNA。将PCR产物与T／A载体连接构建
差减cDNA文库。挑选克隆进行 PCR扩增鉴定。结果：基于高脂组和高脂并间歇性缺氧组兔腹主动脉
和肝病理改变的基础，构建的差减 cDNA文库包含500个克隆，其中462个有插入片段，大小为250—
700 bp。鉴定获得1个新基因Cthrc1，GenBank登录号XM一418373。结论：对Cthrc1基因的研究有助于
进一步阐明慢性间歇性缺氧促进动脉粥样硬化形成的分子机制。
[关键词] 高脂血症； 间歇性缺氧； 抑制性差减杂交； cDNA文库
[中图分类号] R563．8 [文献标识码] A [文章编号] 1672—7347(2007)06—1013—07
Construction of a subtracted cDNA library of chronic intermittent
hypoxia rabbit liver by suppression subtractive hybridization
WU Yue—tao，LIU Rui—hong，YANG Yu，LUO Ying—quan，RONG Yao
(Departm~nt of Geriatrics，Second Xiangya Hospital，Central South University，Changsha 41O011，China)
Abstract： Objective To construct a subtracted cDNA library of chronic intermittent hypoxia
(CIH)rabbit liver by suppression subtractive hybridization(SSH)．Methods Twenty—four rabbits
were divided into 4 groups：ordinary feeding group，full—fat food group，ordinary feeding in chronic
intermittent hypoxia group，and full—fat food in chronic intermittent hypoxia group．The mRNAs were
extracted from different rabbit livers and converted into double—strand cDNA．After digestion with re—
striction enzyme，the cDNA of hyperlipidemia—sensitive rabbit group was subdivided into 2 portions
and each one was lighted with different adaptors．Two rounds of both hybridization and su
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