实验六鸡蛋清中清蛋白的提取与定量测定.doc

实验八：鸡蛋中卵清蛋白的提取和定量测定 分16组，每组两人 一、目的 掌握盐析沉淀法提取鸡蛋卵清蛋白的提取和定量测定（考马斯亮蓝G-250） 二、原理 沉淀法也称溶解度法。其纯化生物大分子物质的基本原理是，根据各种物质的结构差异（如蛋白质分子表面疏水基团和亲水基团之间比例的差异）来改变溶液的某些性质,(如PH，极性离子强度，金属离子等)，就能使抽提液中有效成分的溶解度发生变化。换句话说就是，不同物质置入相同的溶液，溶解度是不同的；相同的物质置入不同的溶液，溶解度也是不一样的。因此选择适当的溶液就能使欲分离的有效成分呈现最小溶解度，而使杂质呈现最小的溶解度，或者相反，有效成分呈现最小溶解度，而杂质呈现最大的溶解度，然后经过适当的处理，即可达到从抽提液中分离有效成分的目的。 盐析法是根据蛋白质再稀盐溶液中，溶解度会随着盐浓度的增高而上升（盐溶），但当盐浓度增高到一定数值时，其溶解度又逐渐下降，直到蛋白质析出（盐析），盐析导致蛋白质分子表面电荷被中和，水化膜被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液析出。 三、实验材料 鸡蛋 四、实验步骤 1.将鸡蛋一端敲一小孔，用吸管吸取卵清蛋白2.5毫升，加生理盐水2.5毫升得到稀释液 2.逐滴加入饱和硫酸铵溶液5毫升（边加边搅拌）静置10分钟，3000转每分钟离心10分，弃沉淀，取上清液。 3.再在上清液中加固体硫酸铵，至不能在溶解硫酸铵为止，静置10分钟 4. 置于离心管中以3000转每分钟离心十分钟，弃上清液，沉淀用5毫升生理盐水溶解（粗产品） 5. 取1毫升粗产品进行稀释，使其吸光值在0.1-1之间。 6. 用1毫克每毫升的标准牛血清蛋白溶液制作标准曲线及测定上述稀释后产品的蛋白含量 7.记录结果，数据处理。 实验八、鸡蛋中卵清蛋白的提取和定量测定 分16组，2人一组， 所需仪器：大试管架16个 带塞比色管16组×7支=128支 比色皿6套×4个=24个 722分光光度计6台 1毫升移液管16×2支=32支 2毫升移液管16×2支=32支 5毫升移液管16×2支=32支 10毫升带赛试管16×2支=32支 钥匙6把 吸管16支 吸耳球16×2支=32个 离心管16×2支=32支 离心机4台 所需要药品： （1）标准蛋白质溶液：0.1mg/ml（每组需6毫升）四个班配500毫升。 称取50 mg牛血清蛋白溶于0.9%氯化钠溶液500毫升。 （2）考马斯亮蓝G-250染料试剂（每组需50毫升）配3000毫升棕色瓶保存 称考马斯亮蓝G-250 0.1克，溶于95%乙醇溶液50 ml，再加入85%磷酸（50g/L）100 ml，用水稀释至1000 ml，此溶液在室温下可放置1个月 （3）0.9%氯化钠溶液（每组需8 ml）配1000 ml （4）硫酸铵饱和溶液（配500毫升） （5）硫酸铵固体（6瓶）