溶血磷脂酸受体在卵巢上皮性肿瘤中的表达及生物学意义.pdfVIP

中文摘要 两种方法，检测LPAl、LPA2及LPA3三种受体在卵巢上皮癌、 卵巢良性上皮肿瘤及卵巢正常上皮中的表达，并分析LPA与 卵巢癌的恶性生物学行为之间的关系。 方法：本课题实验所选用的研究标本取自2003年6月至 2004年12月河北医科大学第四医院妇科的手术切除标本，均 经术后病理确诊的卵巢癌42例(浆液性囊腺癌18例，宫内膜 样癌15例，粘液性囊腺癌9例)，卵巢良性上皮性肿瘤8例(浆 液性囊腺瘤3例，粘液性囊腺瘤5例)及正常卵巢上皮8例(均 取自子宫肌瘤患者，取卵巢表面约2—3mm厚的皮质)。按 在病理分级上Gl级6例，G2级25例，G3级11例。所有组织标 本于离体后2小时内放入液氮中骤冻，而后保存于一80℃冰 LPA，和LPA，的mRNA的转录水平。从组织标本中提取总 RNA，并通过电泳和紫外分光光度仪鉴定RNA的完整性及纯 度。待扩增引物据NCBI 7 断长度为342bp，5 (U)，5 7(L)；LPA2扩增 7 片断长度为299bp，5 (U)，5 7(L)；LPA3扩 7 57．ACACCCATGAAGCTAATGAAG一3 增长度为379bp， B—actin (U)，5 7(L)； 扩增长度为838bp，5 TGAGCTGCG一35 7(U)， ATCTGC．3 7(L)。温度循环参数： 2 中文摘要 对扩增产物进行电泳分离，用凝胶成像系统照相并分析结 果。将靶基因与内参照基因D—actin的表达水平的比值作为表 达参数，起到校正作用以减少加样不均所造成的误差。(2)： W-estem 本中提取总蛋白质后，按考马斯亮蓝试剂盒说明测定蛋白质 浓度，取30ug的总蛋白质加入等体积的(2×)上样缓冲液 上样，SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，根据标准分子量蛋白 40KD)进 质来确定待测蛋白质的位置(LPA250I①、LPA3 行转膜：由正极向负极按滤纸一膜一胶一滤纸的顺序，90V 140mA3小时，5％脱脂奶粉封闭1小时，加入一抗，4。C过夜， 清晨洗膜后加入二抗，封闭1小时，最后加入DAB显色。用 计算机图像扫描分析系统对图像进行扫描分析(Gel．Pro Analvze)以密度值作为蛋白质水平的定量标准。所有数据应 用SPSS12．O版统计软件进行分析，采用f检验和方差分析，以 尸0．05定义为有统计学意义。 常卵巢和良性卵巢肿瘤中的表达均明显高于卵巢癌 明显高于正常卵巢和良性卵巢肿瘤(庐4．39，尸O．05)。在卵巢 癌病理分期上，LPA】在早晚期患者中的表达无明显差异 但无显著差异(户一1．07，胗O．05、)。在卵巢癌不同的病理分级 中文摘要 LPA3在G。级的表达呈增高趋势，但无显著差异伊= 达：由于抗体来源比较困难，故未检测LPA，在蛋白质水平 上的表达。LPA2在卵巢癌中的表达明显高于正常卵巢皮质和 显高于正常卵巢皮质和卵巢良性肿瘤旷=6．77，尸0．05)。LPA2 在晚期患者的表达明显高于早期患者(产5．34，尸O．05)；LPA3 在G，级中的表达有增高趋势，但无显著差异 无明显差异俨O．05)。 结论：1在基因水平上，LPA，受体在正常卵巢上皮和良 性卵巢肿瘤中的表达均明显高于卵巢上皮癌