白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas-FasL基因表达的影响论文.docVIP

　　白英提取液对人肺癌A549细胞凋亡及Fas/FasL基因表达的影响论文 涂硕，韦星，赵小曼，余乐涵，万福生 【摘要】 目的 探讨白英提取液(STE)对人肺癌A549细胞凋亡及fas/fasL基因表达的影响。方法体外培养肺癌A549细胞，以0（正常对照组），10，20和40 mg/ml STE处理A549细胞48 h.freelg/L顺铂（DDP）作为阳性对照。采用MTT法检测细胞增殖抑制率，TUNEL法检测凋亡率，半定量RT-PCR检测fas和fasL mRNA表达。结果与正常对照组比较，STE各浓度组细胞增殖抑制率显著上升（P﹤0.01），细胞凋亡率明显升高（P﹤0.01），基因fas mRNA表达显著上升（P 0.05或P 0.01），而fasL mRNA表达明显下降（P 0.05或P 0.01）。结论STE通过上调fas基因和下调fasL基因表达，诱导细胞凋亡，从而抑制A549细胞增殖。 【关键词】 白英；A549细胞；细胞凋亡；Fas/FasL基因 Abstract：ObjectiveTo explore the effects of Solanum lyratum Thunb. Extract (STE) on induction of apoptosis and the expression of fas and fasL genes in A549 cells. MethodsLung cancer A549 cells g/L for 48h, and the cells g/L DDP as positive control. The proliferation inhibitory rate ined by TUNEL method. The expression of fas and fasL mRNA i-quantitive RT-PCR.Resultspared arkedly(P 0.01).The expression of fas mRNA RNA arkedly(P 0.05 or P 0.01) in STE groups. ConclusionSTE can induce apoptosis by up-regulating expression of fas and fasL genes, and inhibiting the development of A549 cells. Key lyratum Thunb.； A549 cells； Apoptosis； Fas； FasL 白英Solanum lyratum Thunb.，ST为茄科植物，又称白毛藤，临床常用于鼻咽癌、肺癌、肝癌、肺癌、食道癌、胃癌等多种癌症治疗［1］。研究发现，白英提取液（STE）可通过上调fas和下调fasL基因表达，诱导Hela细胞凋亡［2］。本研究通过体外细胞培养，观察STE诱导人肺癌A549细胞凋亡及其对fas/fasL基因表达的影响，探讨ST对肺癌作用的可能分子机制，为肺癌防治提供实验依据。 1 器材与方法 1.1 材料 1.1.1 细胞 人肺癌A549细胞株由中科院上海细胞生物研究所细胞库提供。 1.1.2 试剂与仪器 胎牛血清(FBS)、RPMI 1640培养基为GIBCO公司产品，四甲基偶氮唑蓝（MTT）为上海普飞生物技术有限公司产品，原位细胞凋亡检测试剂盒为北京中杉金桥生物技术公司产品，总RNA提取试剂盒为BIODEV-TECH公司产品，Access RT-PCR system为Promega公司产品，PCR引物为上海生物工程公司合成。KHB K3 酶标仪(芬兰), 倒置显微镜(Cioc)，BX51型显微镜（OLYMPUS），PCR仪（杭州郎基）。 1.2 方法 1.2.1 STE的制备 取ST(购买于江西南华医药有限公司中药材分公司，产地安徽)干品50 g，用500 ml水浸泡1 h，加热煮沸后小火煎熬60 min，室温冷却，120目网筛过滤，弃药渣，滤液离心(3 000 r/m，20 min，2次)。取上清液，浓缩至50 ml，调pH值为7.0～7.2，0.22 μm过滤除菌，获生药含量为1.0 g/ml STE，-20℃保存备用，实验时将含10%胎牛血清RPMI 1640培养液稀释至所需的药物浓度。 1.2.2 细胞培养和药物处理 人肺癌A549细胞，以含100 U/ml青霉素、100 μg/ml链霉素、10% FBS的RPMI 1640培养液，在37℃，5% CO2的培养箱中培养，细胞生长至对数增殖期，更换含0，10，20 mg/ml和40 mg/ml STE新鲜培养液，用DDP（25 mg/L）为阳性对照组，药物作用时间均为48 h。