重组质粒用引物BCD而不用AD扩增才得完整的目的基因？.docVIP

（6）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。其过程是：提取????? 植株的DNA，用限制酶处理后，再用?????? 将获得的DNA片段连接成环（如右图），以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片段中选取??? 作为引物进行扩增，得到的片段将用于获取该基因的全序列信息。解析：（1）顶芽产生生长素，运输到侧芽抑制侧芽的生长发育。（2）野生型拟南芥是否被农杆菌转化，可在个体水平进行检测，看它是否具有抗除草剂性状。因此可将其种植在含除草剂的培养基中。（3）为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T 代播种在含盐的培养基上，获得所需个体。（4）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与野生型植株进行杂交，再自交1代后统计性状分离比。如果出现3：1的分离比，则为单基因突变。（5）这个“该突变体”应指第（4）小题的抗盐突变体，所以插入之前野生型基因的存在导致植物的抗盐性降低。（6）因为要扩增的是被插入基因片段，所以应提取突变体植株的DNA。将DNA片段连接起来的酶是DNA连接酶。图示中表示出了DNA合成方向是：引物A是顺时针方向，那么，B、D就是逆时针方向，C也是顺时针方向。利用A、D这对引物扩增的将是T-DNA片段，而利用B、C这对引物扩增的才是被插入的基因片段。