P（GMA-co-MMA）磁性复合微球的制备及木瓜蛋白酶的固定化.pdfVIP

助 财 料 2011年第4期(42)卷 P(GMA-co-MMA)磁性复合微球的制备及木瓜蛋 白酶的固定化 任 琦，陈秋云，倪忠斌，陈明清 (江南大学 化学与材料工程学院，江苏 无锡 214122) 摘 要： 在改性 Fe。0 纳米颗粒存在的条件下用乳 酶 的酶学性质 。 液聚合法制备 了表面带有环氧基的聚甲基 丙烯酸缩水 2 实 验 甘油酯一聚甲基丙烯酸 甲酯 P(GMA—CO—MMA)磁性复 合微球 ，对其粒径、形态、磁含量、磁性质进行 了表征； 2．1 仪器与试剂 在复合微球表面引入氨基后 ，以戊二醛为交联剂，固定 双光束紫外可见分光光度计 (UV)，UV一1100型， 木瓜蛋 白酶 ，探讨 了给酶量 、戊二醛浓度对 固定化酶活 北京瑞 利分 析仪 器 公 司制造 ；透射 电子 显微 镜 性的影响，考察了酶学性质。结果表明，该复合微球的 (TEM)，JEM一2100型 ，日本 JEOL公司；热重分析仪， 平均粒径为 170nm，具有超顺磁性，磁含量可以控制在 TGA／SDTA85e型 ，瑞士 MettlerToledo公司；磁强 2O ～5O 之 间；当戊 二 醛 浓度 为 5 ，给 酶 量 为 计 (VSM)，EV7型 ，美国ADE公司。 200mg时，达到 固定化酶 最适使 用条件 ，其在热、酸碱 甲基丙烯 酸缩 水甘油酯 (GMA)，AcrosOganics 和操作稳定性上均优于游离酶 。 公司，直接使用 ；甲基丙烯酸甲酯 (MMA)，国药集团化 关键词 ： 甲基丙烯酸缩水甘油酯；乳液聚合 ；磁性复 学试剂有限公司，用 AlO。柱除去阻聚剂；过硫酸钾 合微球 ；固定化酶 (KPS)，国药集团化学试剂有 限公司，重结晶后使用； 中图分类号： O63；O61 文献标识码 ：A 二乙烯 苯 (DVB)，工 业级 ，直 接使 用；三 氯醋 酸 文章编号 ：1001—9731(2011)04—0730—04 (TCA)，NH。 ·H O (28 (质 量 分 数 ))，戊 二 醛 (GA)，十二烷基苯磺 酸钠 (SDS)，酪蛋 白，木瓜蛋 白 1 引 言 酶，国药集团化学试剂有限公司，直接使用。 磁性复合微球不仅有聚合物的特性 ，同时具有磁 2．2 P(GMA—CO—MMA)磁性复合微球的制备 性 ，可在外加磁场的作用下实现有效的移动，用于快速 将 lg改性 Fe。()4纳米颗粒加入溶解有 0．24g的 分离，当撤去外加磁场微球可重新分散 ，因此其常被用 SDS的水溶液中，将混合溶液移入装有搅拌器、回流冷 作高效载体 ，在固定化酶_l1]、蛋白质分离 “等生物领 凝管的250mL四口圆底烧瓶 中，充分搅拌乳化 30rain， 域中广泛应用l5j。传 统 固定化酶主要有物理吸 附 加入含有 2．1gMMA，0．6gGMA与 0．3gDVB的混合 法 和共价结合法[】，物理吸附法是通过氢键、静 电 单体 ，通氮除氧30min，升温至70~C后加入0．06g引发剂 等物理作用力将酶固定于不溶性载体上，但是，酶和载 KPS，反应 24h。对产物进行磁分离，用水洗涤 3次 ，得 体间的吸附力较弱 ，当体系的pH，盐浓度及温度变化 到P(GMA-co-MMA)磁性复合微球。 时容易脱吸附。共价结合法是通过在固相载体表面引 2．3 复合微球的表面改性 入羟基 ¨、氨基_】、羧基 |1引、羰基口。等活性基 团，和酶