虾青素对ECV304细胞的抗氧化作用及其作用机制论文.docVIP

　　虾青素对ECV304细胞的抗氧化作用及其作用机制论文 宋晓冬 刘文波 张丽霞 杨 成 张瑾锦 王秀文 【摘要】 目的 研究虾青素的抗氧化作用并探讨其作用机制。方法 MTT、LDH释放实验检测了虾青素对ECV304细胞活力的影响，超氧化物歧化酶（SOD）、二氨基二苯甲烷（MDA）、细胞内氧化应激活性氧（ROS）、一氧化氮（NO）的测量实验检测了虾青素对ECV304细胞的抗氧化作用，ATP、细胞色素C氧化酶（COX）、线粒体跨膜电位的测量实验检测了虾青素对ECV304细胞线粒体的保护作用。结果 虾青素能保护细胞膜不受损伤，提高细胞活力，降低ROS、MDA的含量，升高SOD活性和NO含量。同时，虾青素还能显著升高ATP水平和COX活性，线粒体跨膜电位有所升高。结论 虾青素的抗氧化作用可能是通过保护线粒体功能实现的。 【关键词】 虾青素；抗氧化作用；线粒体跨膜电位；ATP 【Abstract】 Objective To study astaxanthin antioxidative action in ECV304 cells and its mechanism. Methods The effects of astaxanthin on cell viability ethods. The effects of astaxanthin on antioxidative action ined by SOD activity and the contents of MDA,ROS and NO. The protective effects on mitochondria itochondrial membrane potential.Results Astaxanthin could protect cell membrane, increase cell viability, SOD activity, NO content,ATP level, COX activity and mitochondrial membrane potential.Meanight be pleted through the pathitochondria. 【Key itochondrial membrane potential，ATP 正常情况下，机体的自由基处于不断产生与清除的动态平衡之中，是机体有效的防御系统。但自由基如果产生过多或清除过慢，它可以通过攻击生命大分子物质及各种细胞器，造成机体在分子水平、细胞水平及组织器官水平的各种损伤，加速机体的衰老进程并诱发各种疾病，其中包括常见的肿瘤、动脉硬化、中风、心脏病、白内障、糖尿病等［1～6］，因此寻找清除自由基和抗氧化的药物是非常重要的。 虾青素(astaxanthin)是唯一能通过血脑屏障的酮式类胡萝卜素，在其分子中，有很长的共轭双键、羟基和在共轭双键链末端的不饱和的酮基，其中羟基和酮基又构成α羟基酮，这些结构都具有比较活泼的电子效应，能向自由基提供电子，使得虾青素具有抗氧化作用。本实验通过虾青素对H2O2氧化损伤人血管内皮细胞ECV304的保护作用，初步研究了虾青素的抗氧化作用及其作用机制。 1 材料与方法 1.1 仪器和试剂 虾青素、DMEM粉剂、MTT购自Sigma公司， LDH、 MDA、SOD测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所，NO、ROS、ATP、线粒体分离试剂盒、线粒体跨膜电位测定试剂盒购自碧云天生物技术研究所，荧光分光光度计购自美国埃尔默公司，酶标仪购自上海雷勃分析仪器有限公司，流式细胞仪购自美国贝克曼公司。 1.2 细胞培养 人血管内皮细胞ECV304购自美国ATCC，细胞接种于培养瓶内，加入含10％胎牛血清、青霉素、链霉素的DMEM细胞培养液，每2～3 d更换1次培养液，待培养形成的细胞汇合成单层细胞以后，用0.25％胰蛋白酶消化传代或接种于培养板上，保持细胞状态良好以备实验使用。 1.3 ECV304细胞分组处理 将ECV304细胞分为对照组、模型组、高/中/低不同剂量药物组。对照组和模型组使用正常培养液进行培养,高、中、低不同剂量药物组分别用含0.2、2.0和20 μg/L 的虾青素培养液培养,48 h 后除对照组外均用100 μmol/L 的H2O2进行处理8 min ,离心去掉上清液备用。 1.4 MTT检测 将ECV304细胞接种于96孔板，药物处理后每孔加15 μl染料溶液MTT，放入37℃、5%CO2培养箱中培养4 h，吸弃上述溶液后，加100 μl异丙醇终止液，室温30 min，酶标仪上570 nm处测定OD值。 1.5 乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase，LDH）释