第八章 QIAamp DNA micro-显微切片中提取DNA.pdfVIP

Sample Assay Technologies Isolation of Genomic DNA from Laser-Microdissected Tissues(QIAamp® DNA Micro Handbook) 2011年12月 胡川 Sample Assay Technologies 须知 该操作手册适用于从激光显微切片组织中提取基因组DNA。因为起始样本非常微 小，用激光显微切片组织样本做分子检测分析尤为困难。特别是经过固定和染色步 骤的样本，其DNA完整性会被破坏，可能需要修改组织固定的操作步骤或用冷冻 切片机做冷冻切片来降低DNA被破坏的程度。更多的切片、染色、显微切片的仪 器和耗材信息，您可以从莱卡获得 （ ）。 重要重要须知须知：： 重要重要须知须知：： 所有离心步骤在室温下进行(15–25°C) 如果纯化DNA的样本细胞非常少，需要使用carrier RNA （见第3页PPT） 准备准备工作工作：： 准备准备工作工作：： 将样本平衡至室温(15–25°C) 将用于洗提的Buffer AE或者蒸馏水平衡至室温 将thermomixer或旋转加热孵育装置加热至56°C 以备第3 步使用。如果没有以上 设备，可以用加热模块或者水浴装置代替 如果Buffer AL 和Buffer ATL有沉淀，可加热至70°C 并温和晃动使其溶解 按照第14页中的说明配置好Buffers AW1 和AW2 （见第5页PPT） 显微切片DNA提取，2011年12月 2 Sample Assay Technologies Carrier RNA的使用 在Buffer AL 中加入Carrier RNA 为了从微量样本中纯化DNA （例如，血样低于10 µl），我们推荐在Buffer AL 中加 入carrier RNA 。对于足量的DNA样本，这一操作是非必须的。在装有310 µg 冻干 carrier RNA 的管子中加入310 µl Buffer AE，得到1 µg/µl的溶液。充分溶解后，分 装冻存于–20°C 。不要反复冻融超过3次。 依照Table 1 中的数据，计算每个样本所需Buffer AL 和carrier RNA 的量，乘以处理 的样本数，即可知道每次使用的Buffer AL 和carrier RNA的量。将吸取误差考虑在 内，每次可多计算2个样本的量。 正反倒置管子10次，温和混匀Buffer AL 和carrier RNA 。为了避免产生气泡，请不 要涡旋振荡。注意注意，carrier RNA不是溶解在Buffer AL中。必须先溶解在Buffer AE 注意注意 里，在使用的时候再加入到Buffer AL 中。加了carrier RNA 的Buffer AL可在室温 (15–25°C) 下稳定48 h 。 显微切片DNA提取，2011年12月 3 Sample Assay Technologies Carrier RNA的使用 显微切片DNA提取，2011年12月 4 Sample Assay Technologies 溶液配置 AW1 ：： ：： 加入25 ml 乙醇(96–100%) 至装有19 ml Buffer AW1 浓缩液的瓶中。在加过乙醇 的瓶子外贴好标签。配好的溶液可以在室温(15–25°C) 下储存1 year。 注意注意：在操作前： ，须振荡混匀。 注意注意：： AW2 ：： ：： 加入30 ml 乙醇(96–100%) 至装有13 ml Buffer AW2 浓缩液的瓶中。在加过乙醇 的瓶子外贴好标签。配好的溶液可以在室温(15–25°C) 下储存1 year。 注意注意：在操作前： ，须振荡混匀。 注意注意：： 显微切片DNA提取，2011年12月