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第二章 色谱法的原理 （Principles of Chromatography） 第一节 色谱分析的基本原理 一、色谱分离的本质 分配系数的差异是所有色谱分离的实质性原因 容量因子k 值可直接从色谱图中测得。 k = (t R – t M ) / t M = t?R / t M = V?R / V 0 k值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于柱的容量大，因此又称分配容量。它是衡量色谱柱对被分离组分保留能力的重要参数。k值也决定于组分及固定相热力学性质。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。 3. 分配系数K与容量因子k 的关系 k = CsVS / CmVm = K VS/VM =K / ? (? =VM / VS ) K = k · ? 在分配色谱中，Vs表示固定液的体积；在尺寸排阻色谱中，则表示固定相的孔体积。 其中β称为相比，它是反映各种色谱柱柱型特点的又一个参数。例如，对填充柱，其β值一般为6-35；对毛细管柱，其β值为60-600。 板式精馏塔 塔板理论的导出 将色谱分离过程比拟作蒸馏过程，引用了处理蒸馏过程的概念、理论和方法来处理色谱过程。把色谱柱比作一个分馏塔，色谱柱可由许多假想的塔板组成（既色谱柱可分成许多小段）， 在每一小段（塔板）内，一部分空间为涂在担体上的液相占据，另一部分空间充满着载气（气相），载气占据的空间称为板体积△V。当欲分离的组分随载气进入色谱柱后，就在两相间进行分配。 由于流动相在不停地移动，组分就在这些塔板间隔的气液两相间不断地达到分配平衡。 塔板理论假定： ⑴ 在这样一小段间隔内，气相平均组成与液相平均组成可以很快达到分配平衡，这样达到分配平衡的一小段柱长，称为理论塔板高度H. ⑵载气进入色谱柱，不是连续而是脉动式的，每次进气为一个板体积。 ⑶试样开始时都加在第0号塔板上，且试样沿色谱柱方向的（纵向扩散）扩散可略而不计。 ⑷分配系数和分配比在各塔板上是常数。 为简单起见，设色谱柱由5块塔板（n=5， n为柱子的塔板数)组成，并以r表示塔板编号，r等于0， 1，2，…，n—1，某组分的容量因子k=1,则 根据上述假定，在色谱分离过程中该组分的分布可计算如下： 开始时，若有单位质量，即m=l(1mg或1μg)的该组分加 到第0号塔板上，分配达平衡后， 由于k=l，即p=q， 故p=q=0.5. 当一个板体积(1△v)的载气以脉动形式进入0号板时，就将气相中含有q部分组分的载气顶到1号板上,此时0号板液相中p部分组分及1号板气相中的q部分组分，将各自在两相间重新分配，故0号板上所含组分总量为0.5，其中气液两相各为0.25，而1号板上所含总量同样为0.5，气液两相亦各为0.25。 按上述分配过程，对于n=5，k=1，m=1的体系，随着脉动式进入柱中板体积载气的增加，组分分布在柱内任一板上的总量(气相、液相总质量)见下表。 由表中数据可见，当进气量N=5时，即5个板体积载气进入柱子后，组分就开始在柱出口出现，进入检测器产生讯号(见下图，图中纵坐标x为组分在柱出口出现的分数）。 由图7-4可以看出，组分从具有5块塔板的柱中冲洗出来的最大浓度是在N为8和9时。流出曲线呈峰形但不对称。这是由于柱子的塔板数太少的缘故。 经多次分配后的浓度分布 当n50时，就可以得到对称的峰形曲线。在气相色谱中，n值是很大的，约为103~105，因而这时的流出曲线可趋近于正态分布曲线。这样， 式中co为进样浓度，tR为保留时间，σ为标准偏差，c为时间t时的浓度，此式称为流出曲线方程式。 以上讨论单一组分在色谱柱中的分配过程。 2、有两个物质在色谱柱中的分配及流出曲线 假如有A,B两个物质 A的K=1/3 B的K=3 色谱柱固定相和流动相体积相同 两个物质经过色谱柱之后的流出曲线如图： 分配系数为 0.33及3.00 的A、B二组分经多次分配的结果 若试样为多组分混合物，则经过很多次的分配平衡后，如果各组分的分配系数有差异，则在柱口处出现最大浓度时所需的载气板体积亦将不同，由于色谱柱的塔板数相当多，因此分配系数有微小差异，仍可获得好的分离效果。 色谱