全血基因组提取试剂盒I.PDFVIP

深圳依诺金生物科技有限公司 产品说明书 全血基因组提取试剂盒I 产品简介： 本试剂盒通过裂解红细胞、裂解白细胞及细胞核、沉淀蛋白、分离基因组等过程从全血 中提取基因组。试剂盒特点：提取的基因组 DNA 长度大于20kb, 可用于PCR 扩增、内切酶 消化以及膜杂交等；每 300ul 全血样品预期提取量5-15ug；所提基因组DNA 效果好；提取 过程不超过45 分钟；可室温保存 1 年。本试剂盒提供 100 次300ul 全血样本基因组提取的 足量试剂。 本试剂盒也可用于培养细胞，组织基因组以及培养细菌或真菌基因组 DNA 的提取。 试剂盒组成 1、红细胞裂解液：50ml×2 瓶 2、细胞核裂解液：35ml×1 瓶 3、 蛋白沉淀液： 12ml×1 瓶 4、DNA 溶解液：12ml×1 瓶 5、 操作说明书： 1 份 自备试剂 本试剂盒没有提供，但必备的试剂包括：异丙醇（国产分析醇）；70% 乙醇。 样品 1、样品要求：用于 DNA 提取的全血应为抗凝血（EDTA, 肝素或柠檬酸钠抗凝），抗凝血在 4°C 存放 5 天以内 （存放时间长，DNA 产量低），-20°C 存放一个月以内, -80°C 至少可 存放 2 年均能纯化出高质量的DNA （冻存血较新鲜血产量低）。 2、全血需求量：本试剂盒可一次提取少至20-300ul,多至10ml 的全血DNA,标准提取量为 300ul。 注：血液及组织标本应视为传染性材料处理。 操作程序(以300ul 或3ml 全血为例) 1、 吸取300ul 或3ml 混匀的全血至 1.5ml 或 15ml 离心管中，分别加入900ul 或9ml 红细胞裂解液。上下颠倒5-6 次混匀。室温下待红细胞裂解（陈旧血可即刻进行下一步， 新鲜血需 10 分钟左右），此间可颠倒2-3 次。 2、 离心。300ul全血，13000-16000 ×g离心20 秒钟；3ml全血2000 ×g，离心10 分钟。 3、 倾去上清，不要扰动底部沉淀。300ul全血，保留大约 10-20ul残液； 3ml全血，保留 大约 50-100ul残液，有时离心沉淀液中无明显团块沉淀，只有少量透明絮状沉淀，保 留透明絮状沉淀，继续进行提取。 电话：（0755） 传真：（0755） 网址：, 电子邮件：info@ 深圳依诺金生物科技有限公司 产品说明书 4、 分别加300ul或3ml细胞核裂解液，混漩器震荡20 秒，或用手指弹击管壁，或上下颠 倒离心管，促使核裂解。此时溶液应变得粘稠，若有块状不溶物，应在 55-65℃左右水 浴中助溶 20 分钟或更长时间（对 DNA损伤小），或混漩器震荡（对 DNA损伤较加热 助溶大）。 有时块状不溶物难以溶解，可震荡数秒—上下颠倒离心管数秒轮番进行，至 透过光线观察，无不溶物或局部胶冻状物。白细胞核完全溶解是成功的关键。此时可进 行下一步或选用RNase A后进行下一步。RNase A的使用方法为：300ul全血加 1.5ul、 3ml全血加 15ul 4 mg/ml的 RNase A, 混匀，37℃孵育15 分钟，冷却至室温。 5、 分别加入细胞核裂解液 1/3 体积的蛋白沉淀液，上下颠倒若干次，充分混匀，可见块状 蛋白沉淀开始出现。离心。300ul 全血，13000-16000 ×g 离心3 分钟；3ml 全血， 2000 ×g,离心10 分钟。离心后，上清仍较混浊，或因红细胞碎片存在而呈红色，应在 上清中再加入适量蛋白沉淀液，混匀后再次离心，室温条件下，上清中的 DNA 至少可 保存 18 个月。 6、 将上清液转移至新的离心管中，加入等体积异丙醇，混匀，此时可见线状DNA 形成团， 离心，同步骤5 中的离心。 7、 倾去上清，离心管中加入与核裂解液等体积的70%的乙醇溶液（基因组DNA 在70% 乙