生物专业植物生理实验论文低温胁迫对菠菜叶片抗寒性的影响颖（可编辑）.doc

生物专业植物生理实验论文低温胁迫对菠菜叶片抗寒性的影响颖 1 材料与方法 1.1 材料 菠菜(Spinach)、市售 1.2 方法 (一)外渗电导率的测定 1、取菠菜叶片打孔40片,分成4份,至于4个小烧杯中。 2、将两个烧杯中的叶片放入冰箱中冷处理10min。 3、取蒸馏水10ml测定电导率(S0)。 4、将处理的和未处理的4份叶片分别放入注射器中,吸收10ml蒸馏水,堵住注射器口进行抽气至叶片全部沉入水中。 5、将注射器内的蒸馏水和叶片倒入洁净烧杯中,再加入10ml蒸馏水,摇匀后测定电导(St1)。 6、测定后,将烧杯中的液体煮沸,冷却至室温,测电导(St2)。 过氧化物酶活性的测定 取0.5g叶片、加入少量磷酸缓冲液研磨至匀浆,转入离心管中,4000r、离心10min,然后取上清液定容至10ml,备用。 测定 样品 对照 pH5.5、0.05molPBSml 2.8 2.8 0.05M愈创木酚溶液(ml) 1.0 1.0 2%H2O2ml 1.0 1.0 酶液(ml) 0.2 0.2 2%三氯乙酸(ml) ?? 2.0 3、470nm波长下测定吸光度,每隔30s记录数值; 4、根据测量数据制作制作吸光度时间曲线。 1.3 生理指标的测定方法 过氧化物酶活性的测定:愈创木酚法[7] 过氧化物酶是植物体内普遍存在的,活力较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用、及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活力不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。在H2O2存在的条件下,过氧化物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色的4-邻甲基苯酚,该物质在470nm处有最大吸收峰,可用分光光度计测量470nm的吸光度的变化,从而测定过氧化物酶的活力。ΔOD470越大,说明过氧化物酶活力越高,反之亦然,故可通过测470nm处的吸光度变化来测定过氧化物酶的活性[5] 外渗电导率的测定:DDS-307电导率仪法[8] 植物在遭受低温胁迫后,细胞膜遭到破坏,膜透性增大,从而使细胞内的电解质外渗,以致植物细胞浸提液的电导率增大。基于电导率测定得出低温胁迫对植物抗寒性的伤害率,电导率越大表明植物受到的伤害程度越大。抗寒性较强的植物在冻害较轻的情况下,不仅膜的透性变小,而且渗透性的变化可以逆转、已恢复正常;反之,抗寒性弱的细胞或者受害重者膜透性明显增大,而且不能恢复正常以致造成伤害甚至死亡。这种明显地出现在外部形态的变化之前,因此可以作为抗寒性的生理指标。 结果与分析 表1测电导率的原始数据 处理煮沸前(St1)(μΩ-1 煮沸后(St2)(μΩ-1 Sck 正常 第1组 60 5200 第2组 58 4900 St 冷冻 第1组 5500 6400 第2组 5100 6200 公式: LSt1-S0/St2-S0 S0 6μΩ-1 伤害度(%)(Lt-Lck)/(1-Lck)×100 表2 测过氧化物酶活性的原始数据 时间(min 0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 正常处理 0.053 0.088 0.126 0.152 0.172 0.187 0.197 0.204 0.209 冷冻处理 0.046 0.067 0.088 0.103 0.117 0.126 0.134 0.140 0.145 根据原始数据,制作吸光度时间曲线,如下图: 公式: 过氧化物酶活性(ΔA470×Vt)/W×Vs×0.01×t [u/(g?min)] ΔA470:斜率 W:样品重(g)0.5 t:反映时间(min)1 Vt:酶液总体积(ml)10 Vs:测定时取用酶液体积(ml)0.2 表3 低温胁迫下菠菜生理指标的测定结果 品种 温度(℃) 过氧化物酶活性 电导率L伤害度%(U/g?min) 菠菜室温 350 0.01 85.86 ?20 290 0.86 2.1 过氧化物酶过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活力较高的一种酶,它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植物生长发育过程中,它的活力不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物内代谢的变化。△OD470越大,说明对应的过氧化物酶活力越高,反之亦然。 2.2 外渗电导率 当植物受到逆境影响时,如高温或低温、干旱、盐渍、病原菌侵染后,细胞膜遭到破坏,膜透性增大,从而使细胞内的电解质外渗,以致植物细胞浸提液的电导率增大。本实验中,40℃恒温培养箱内萎蔫0.5~1h的处理叶片,等于受到了高温及干旱逆境的影响,相对于对照来说,其叶片细胞膜遭到破坏,膜透性增大,从而使细胞内的电解质外渗,以致处理叶片细胞浸提液的电导率增大。试验中