第七章细胞培养.PDFVIP

第七章 细胞培养 第一节 单细胞培养 教学目标  掌握单细胞的分离方法。  掌握单细胞的培养方法。 教学内容 单细胞的分离 单细胞的培养 影响单细胞培养的主要因素 一、 单细胞的分离 由完整的植物器官分离单细胞 由培养组织（如愈伤组织）中分离单细胞 （一）由完整的植物器官分离单细胞 叶片是分离单细胞的最好材料 机械法 酶解法 1、机械法 叶组织是分离单细胞的最好材料。目前， 有两种方法可获得单细胞。  用刀片刮叶片  叶片研碎、离 方法A ：用刀片刮叶片(花生成熟叶片) 撕去表皮 露出叶肉细胞 用解剖刀刮下细胞 方法B ：叶片研碎、离 加研磨介质 轻轻研磨 过滤、离 研磨介质：40ml 20umol Sucrose 10umol MgCl 2 20umol tris—HCL (三羟甲基氨基甲烷 ) PH 7.8 注意：只有薄壁组织排列松散，细胞间结触点很少 时用机械法分离叶肉细胞才能取得成功。 注意：大麦、小麦和玉米很难通过酶解法 使细胞分离。 （叶肉细胞伸长，并在许多地方收缩，细 胞间形成一种互锁结构） 事例 分离篱天剑叶肉细胞的机械方法 叶片消毒 10ml培养基 过滤 2 1.5克1cm 叶片 75％酒精， 匀浆 7％次氯酸钠 离心 低速，去碎屑， 游离细胞沉降 植板 2、酶解法 利用果胶酶、纤维素酶处理，分离出具有代谢活 性的细胞，这种方法不仅能降解中胶层，而且还能 软化细胞壁。所以用酶解法分离细胞时，必须对细 胞给予渗透压保护。 Takebe等（1968）最早报道：用果胶酶处理 可以分离大量的叶肉细胞 加果胶酶 过滤 、离 机械法和酶解法比较 1. 细胞不受到酶的伤害； 2. 不用质壁分离； 机械法 3. 细胞产量低； 4. 细胞易破。 1. 细胞受到酶的伤害；